云南苦丁茶有效成分阿克苷（Acteoside）视神经保护作用研究

青光眼、外伤等不同原因造成的视神经损伤的发生机制与缺血、谷氨酸盐浓度升高、氧化氮代谢紊乱及机体自身免疫有关。阿克苷（Acteoside）为云南苦丁茶中的主要成分，具有强抗氧化活性，属苯丙素苷化合物。本课题组通过对大鼠慢性高眼压模型和视神经钳夹伤模型的初步试验，结果显示Acteoside具有视神经保护作用。本项目拟采用不同的给药方式，观察Acteoside是如何对大鼠慢性高眼压模型和视神经钳夹伤模型视网膜神经节细胞（RGCs）及其轴突的保护作用，探讨其作用机理，同时观察Acteoside对RGCs上位神经元活性的作用。本课题的研究将为寻找和开发视神经保护药物提供理论依据。

研究背景与方向：眼外伤视神经损伤致残率高，治疗效果不好，是目前临床的一个难题。其发生机制与缺血、谷氨酸盐浓度升高、氧化氮代谢紊乱及集体自身免疫等多因素有关。阿克苷（Acteoside）为云南苦丁茶中的主要成分，属苯丙素苷化合物，具有强抗氧化活性及外周神经保护作用。但对中枢神经是否具有保护作用的研究甚少。本研究探讨阿克苷直接作用于神经节细胞的安全性及阿克苷对视神经节细胞的保护作用。研究主要内容：1、通过在SD大鼠玻璃体腔内注射浓度不同浓度的阿克苷，于不同时间点摘除眼球行冰冻切片HE染色，观察视网膜结构，并行超薄切片电子显微镜观察视网膜超微结构分析不同浓度阿克苷对视网膜的安全性。2、将SD大鼠随机分为视神经钳夹伤后手术组（A、B）、假手术组(C、D)和空白组。各组按时间点视网膜冰冻切片HE染色计数视网膜神经节细胞数量，免疫组化观察各组大鼠视网膜GAP-43表达情况，TUNEL 法检测RGCs 凋亡情况并取视神经行Western blot检测GAP-43的表达。3、取出生1-3天的SD乳鼠视网膜组织，经过胰蛋白酶消化成，制成RGCs细胞混悬液，接种于细胞培养板中培养72小时后进行细胞形态学观察，并加入浓度不同(5mg/ml、3mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml)的阿克苷溶液。再培养24小时后，MTT细胞计数法测定在不同浓度阿克苷作用下的视网膜神经节细胞的活细胞数量。主要结果：1、玻腔注射浓度为1mg/ml的阿克苷对视网膜无明显毒性。2、视神经钳夹伤后大鼠RGCs数量减少，而玻腔注射1mg/ml的阿克苷可促进RGCs的存活。3、当大鼠视神经受到钳夹伤后，玻腔注射阿克苷可增加视神经受损大鼠视网膜上GAP-43的表达，对RGCs的再生具有促进作用。4、玻腔注射阿克苷对视神经钳夹伤大鼠的RGCs凋亡具有一定的抑制作用。5、玻腔注射阿克苷可增加视神经中GAP-43的表达，对视神经的再生具有促进作用。6、加入阿克苷浓度为5mg/ml和3mg/ml，作用24小时后，对混合培养的视网膜神经节细胞的生长有促进作用。研究结果表明，本研究证实阿克苷对视神经节细胞具有保护作用，并对轴突再生具有促进作用。