从内质网应激探讨虎杖苷、山楂总黄酮配伍抗动脉粥样硬化机制

We found that the toxin-resolving prescription（Polydatin and extraction of Hawthorn）based on"stasis-toxin" pathogenisis had good clinical effect and safety in treating atherosclerosis, and its anti-atherosclerosis mechanism might be related to the regulation of endoplasmic reticulum stress pathway, apoptosis, expression of inflammatory factors, lipid metabolism, endothelium function. This study will choose APOE gene knockout mice as the model of atherosclerosis. It includes two parts, vivo and vitro studys. The protein of epression of GRP78,GRP94, apoptosis, the expression of inflammatory factor, lipid metabolism and the morphology changes of plaque will be detected. The mechanism of anti-atherosclerosis with Polydatin and extraction of Hawthorn will be found through endoplasmic reticulum stress pathway. The finding will explain the connotation of blood-activating and toxin-resolving prescription based on"stasis-toxin" pathogenisis. And we have not found the same report in the prevention and cure of atheroscelrosis in TCM.

课题组前期研究发现基于"瘀毒"病机的解毒活血中药组分配伍（虎杖苷配伍山楂总黄酮）治疗AS疗效明确，我们推测其可能机制是：通过调控内质网稳态， 细胞凋亡、炎症因子表达、血脂代谢及内皮功能，从而发挥抗AS作用- - -本课题以载脂蛋白E基因敲除小鼠为AS模型，体内与体外试验相结合，应用现代生物信息学和生物学前沿技术，从内质网激活标记蛋白GRP78、GRP94表达、细胞凋亡、炎性因子活性与表达、脂代谢变化以及AS斑块形态学改变，从结构与功能角度探讨虎杖苷、山楂总黄酮及其配伍对AS斑块形成及内质网激活状态的影响，探讨该活性组分配伍抗AS的分子机制，验证假说的客观性，研究结果为从一个侧面阐释解毒活血治疗AS的理论内涵，提供了原创性实验依据，在中医药AS的防治研究中未见同类报道。

本项目按照任务书要求，完成了全部计划与任务。.目的：基于中医“瘀毒”理论，观察解毒活血中药组分配伍（虎杖苷配伍山楂总黄酮）对AS斑块形成及内质网激活状态的影响，探讨该活性组分配伍抗AS的分子机制。.方法：本课题以载脂蛋白E基因敲除小鼠为AS模型，体内与体外试验相结合，采用HE染色，Masson染色，油红“O”染色，免疫组织化学，Real-time PCR等技术，观察虎杖苷配伍山楂总黄酮对AS易损斑块病理形态学及其成分的影响，检测内质网激活标记蛋白GRP78、GRP94蛋白及表达，细胞凋亡，促炎因子NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达水平，抗炎因子TGF-β、IL-10蛋白及mRNA表达水平。.结果：给药13周后，虎杖苷配伍山楂总黄酮能够显著降低ApoE（-/-）小鼠AS模型的TC、TG、LDL-C及HDL-C的水平，HDL具有不同程度的升高；病理形态学检测显示：与模型组比较，虎杖苷配伍山楂总黄酮可以显著减轻动脉粥样硬化程度，减少斑块内的泡沫细胞，增加胶原成分；与模型组比较，虎杖苷配伍山楂总黄酮可以显著斑块内细胞凋亡；Real-time PCR、免疫组织化学及Western-blot研究结果显示：虎杖苷配伍山楂总黄酮能够降低主动脉、平滑肌细胞内质网激活标记蛋白GRP78、GRP94蛋白及 mRNA水平；降低促炎因子NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达水平，增加抗炎因子TGF-β、IL-10蛋白及mRNA表达水平。.结论：基于中医“瘀毒”理论的虎杖苷配伍山楂总黄酮具有显著的抗AS，稳定AS易损斑块的作用，其机制可能与调节血脂、抑制细胞凋亡以及调节内质网应激状态有关，值得深入研究。