新型高效抗菌肽分子设计及表达研究

新型抗菌肽分子设计平台建立：以LfcinB和LfampinB为核心，以软件分析和肽合成为主要工具，以抗菌肽抗菌机制为理论依据，通过对螺旋度、电荷、两亲性和疏水性等参数进行计算分析，重点优化电荷和两亲性；使新型抗菌肽对金黄色葡萄球菌抗菌活性在LfcinB15-W4,10基础上提高2～4倍。综合参考"N-端规则"和蛋白酶降解等因素，通过末端酰胺化或氨基酸替换研究影响结构稳定性的关键结构特征，设计抗菌肽半衰期大于10h。研究一级和高级结构对抗菌活性和结构稳定性的影响。高效基因工程表达系统构建及产物纯化：以设计新型抗菌肽为基础，构建多拷贝串联原核融合表达系统和多拷贝串联真核分泌表达系统，设计和优化融合肽和多拷贝串联肽单体之间的切割位点；实现重组抗菌肽诱导表达，融合标签去除，抗菌肽多聚体切割和单体纯化，测定重组肽生物学功能。为新型高效抗菌肽重组表达和最终致力于产业化提供关键基础数据。