基于肽键热振荡理论对热炮制珍珠母物质基础与生物活性变化机理研究

本项目依据肽链热振荡理论，结合膜过滤-凝胶柱-HPLC组合技术对珍珠母生品、超微粉碎品、传统热炮制品肽类成分进行分离纯化，应用NMR、MS、晶体X衍射光谱技术对获得的肽类成分进行结构鉴定，通过PCPA大鼠失眠、抗氧化模型测定肽类成分的活性，从而探求其炮制前后肽类成分的组成、空间结构与活性不同程度变化相关性规律。.在分子水平上突破烤、焙、煅对肽键热振荡作用程度对珍珠母肽键三维空间不同程度结构变化与活性效应关系的瓶颈问题，.建立珍珠母传统热炮制机理的研究新模式。阐明不同炮制方法对动物类中药材蛋白质、肽、酶等大分子物质肽链三维空间结构不同程度的改变，而对药效产生的影响科学内涵。.为制订科学合理的珍珠母加工炮制现代技术规范奠定基础，使对动物中药材炮制生产规范化和国际化产生引领作用。该项目的研究结果，不仅对阐明动物类中药材炮制机理具有重要理论意义，而且对指导动物类中药材炮制生产有广泛的应用前景。

本项目基于肽键热振荡理论，阐明了珍珠母生品、烘烤品、超微粉碎品炮制前后三个不同肽键热振荡程度与珍珠母蛋白、肽的肽键三维空间阶段性结构变化、活性效应差异之间的关系。. 自主行为学实验表明，珍珠母生品、烘烤品、超微粉碎品蛋白、多肽、寡肽均能减少小鼠自主活动的次数，延长小鼠睡眠的时间，能够增加小鼠脑干内5-HT和血中ATCH含量，其中超微粉寡肽作用最强。. 抗抑郁实验中，生品、烘烤品、超微粉碎品均能减少小鼠悬尾实验的完全不动时间。PCPA和AMPT造模组珍珠母及其炮制品高剂量对小鼠悬尾仍有一定抗抑郁作用，说明珍珠母对于小鼠抗抑郁作用机制可能是通过共同影响脑内5羟色胺和儿茶酚胺类物质的以及环磷酸腺苷反应原件结合蛋白来实现的。. 珍珠母生品和烘烤品总肽类化学成分均具有羟基自由基清除能力，烘烤品的抗氧化能力明显强于生品。. SDS-PAGE凝胶电泳分析表明珍珠母生品、烘烤品、超微粉碎品蛋白样品均主要含4条条带，分子量范围在20ＫＤ到５０ＫＤ之间，而且生品、烘烤品和超微粉各条带平行比较时颜色依次加深。HPLC-ESI-MS分析发现珍珠母生品中四个寡肽化合物的结构，分别为Op-1、Op-2、Op-3和Op-4；而炮制品中不含Op-1。. 最终阐明贝壳类动物中药材的热炮制机理的科学内涵。