布鲁氏菌侵染胚胎滋养层细胞过程中关键分子的功能研究

近年来，布鲁氏菌病疫情日趋严重，由该病引发的母畜流产是造成畜牧业巨大经济损失的重要原因之一。布鲁氏菌流产相关因子与胚胎滋养层细胞关键分子的相互作用，在布鲁氏菌引发母畜流产过程中起关键作用。课题组已在国家自然基金的资助下，采用酵母双杂交技术获得了与布鲁氏菌流产相关因子Omp25互作的4个胚胎滋养层细胞关键分子，在此基础上，本研究拟进一步揭示这些关键分子在布鲁氏菌侵染过程中的功能。首先，采用免疫共沉淀技术验证4个胚胎滋养层细胞关键分子，并利用RNA干扰技术检测这些分子表达沉默前后布鲁氏菌增殖的变化；其次将Omp25蛋白和关键分子进行标记，采用激光共聚焦显微镜、电镜技术确定Omp25蛋白与关键分子在胚胎滋养层细胞中互作的定位。通过研究这些关键分子在布鲁氏菌侵染过程中的功能，为进一步揭示布鲁氏菌引发流产的分子机制和筛选新型药物靶点奠定基础。

布鲁氏菌病（简称布病）是由布鲁氏菌引起的一类动物源性人兽共患病，在世界范围内广泛流行，尤其是发展中国家。近几年回升势头迅猛，引起了世界范围的广泛关注。布鲁氏菌病疫情日趋严重，由该病引发的母畜流产是造成畜牧业巨大经济损失。布鲁氏菌流产相关因子与胚胎滋养层细胞关键分子的相互作用，在布鲁氏菌引发母畜流产过程中起关键作用。课题组前期采用酵母双杂交技术获得了与布鲁氏菌流产相关因子Omp25互作的4个胚胎滋养层细胞关键分子，在此基础上，本研究进一步揭示了这些关键分子在布鲁氏菌侵染过程中的功能。课题组采用免疫共沉淀技术验证4个胚胎滋养层细胞关键分子，证实布鲁氏菌OMP25与HPT-8的Ferritin、hypothetical LOC339123出现了配合。并利用RNA干扰技术检测这些分子表达沉默前后抑制了布鲁氏菌增殖。将Omp25蛋白和关键分子进行标记，采用激光共聚焦显微镜、电镜技术确定Omp25蛋白与关键分子在胚胎滋养层细胞中互作的定位，证实布鲁氏菌Omp25蛋白位于细胞的液泡中，也存在于胞液中。通过本研究，为揭示布鲁氏菌引发流产的分子机制提供线索，也为布鲁氏菌病新药物研发、防治及家畜抗病育种工作奠定基础。