知母盐炙前后降血糖作用的物质基础变化与炮制增效机理研究

前期研究发现知母盐炙后降血糖作用显著增强且有新成分产生，本研究以此为切入点，对知母盐炙前后化学成分变化、活性成分确立和药代动力学差异进行研究，以阐明知母盐炙后降血糖作用增强的炮制原理。首先，进行知母、盐知母的HPLC-UV、 HPLC-CAD指纹图谱比较研究，在此基础上，制备分离盐炙后新增成分和增量成分，同时对盐知母降血糖有效部位的化学成分进行系统分离，结合光谱数据和理化性质进行结构鉴定。然后，对以上成分利用酶抑制剂模型，进行α-葡萄糖苷酶抑制剂活性筛选，对筛得的活性成分进一步利用STZ致实验性Ⅱ型糖尿病大鼠模型进行体内活性确定。在上述化学成分研究和活性筛选的基础上，选择3～5个代表性成分为指标，给大鼠灌服生知母、盐知母提取物，比较指标性成分的药代动力学差异。以上述各项研究数据来综合阐明知母盐炙后增效的炮制原理。进而优化前期建立的盐知母炮制工艺、完善前期建立的盐知母质量标准。

前期课题研究时，我们首次发现知母盐炙后降血糖作用显著增强，本课题围绕盐知母降血糖作用开展相关研究。.建立了同时检测4种知母皂苷、同时检测3种双苯吡酮、检测知母中首分成分牡荆素的HPLC方法，盐炙后知母中的知母皂苷BⅢ、BⅡ、AⅢ和芒果苷含量均增加，揭示了盐炙后知母皂苷E转化为知母皂苷BⅢ、BⅡ、AⅢ，新芒果苷转化为芒果苷的转化机理；比较了知母盐炙前后多糖含量的变化；比较了生盐知母HPLC-UV、各极性部位HPLC-CAD指纹图谱的差异，建立了盐知母HPLC-PDA-CAD指纹图谱，证明了知母盐制后化学成分发生了明显的量变及质变。.以高能量饲料加链脲佐菌素（STZ）建立实验性Ⅱ型糖尿病大鼠模型，以空腹血糖（FBG）、口服葡萄糖耐量（OGTT）、糖化血红蛋白（HbAlc）、血清胰岛素(FINS)、胰岛抵抗指数（Homa-IR）、胰岛敏感指数（ISI）为指标，结合体外α-葡萄糖苷酶抑制作用，进一步验证了知母盐炙后降血糖活性增强，并对盐知母降血糖活性部位进行筛选，明确了氯仿层为盐知母降糖活性部位，申请国家发明专利1项，将作为下一步研究的重点。.在上述研究基础上，对盐知母中的增量成分及降血糖活性部位进行成分分离，共得到4个化合物，结构鉴定为知母皂苷BⅡ、AⅢ、顺-扁柏树脂酚和AA-1，其中AA-1为首次从知母中分离得到。对分离得到的化合物及其他主要成分进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性研究，对顺-扁柏树脂酚、AA-1进行了对糖尿病大鼠降血糖作用比较。结果表明，顺-扁柏树脂酚的α-葡萄糖苷酶抑制活性，及对STZ致Ⅱ型糖尿病大鼠降血糖作用均表现出一定作用，下一步研究将进行确认。.以芒果苷、新芒果苷为指标，以正常大鼠、STZ致Ⅱ型糖尿病大鼠为受试对象，给大鼠灌服生知母、盐知母提取物，比较了芒果苷、新芒果苷在大鼠体内药代动力学及组织分布的差异。研究表明，盐炙能够促进芒果苷、新芒果苷在大鼠体内的吸收。.以芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ含量为指标，优化了盐知母炮制工艺，确定盐知母最佳工艺为：每100g知母加3g盐，150～170℃，炒制7分钟。.完善了前期建立的盐知母质量标准，增加了知母皂苷BⅢ、BⅡ、AⅢ含量测定指标，规定盐知母饮片中含知母皂苷BⅡ不得少于3.20%，含知母皂苷B Ⅲ不得少于2.40%，含知母皂苷A Ⅲ不得少于1.80%，含芒果苷不得少于0.8%。