改良三甲散对老年性痴呆病大鼠皮层和海马炎性因子的调控

运用整体和细胞实验方法，从分子、基因水平，研究老年性痴呆病炎性反应的病理基础，探讨改良三甲散治疗该病的抗炎性反应的效应和机理。采用大鼠腹腔注射D-Gal使其急性衰老的基础上，一次性缓慢双侧海马内注射Aβ1-42和Ibo制作AD模型,研究实验大鼠海马、皮层星形胶质细胞和小胶质细胞的形态学改变，β-淀粉样前体蛋白的表达，TNF－α、TNF－β，IL-1α，IL-1β，IL-6 ，NF-κB，MAPK，TNF－αG252A，TNF－βG252A的变化，同时研究改良三甲散高、中、低剂量组对上述研究指标的影响。采用在乳鼠海马神经元细胞中，加入经老化处理的Ａβ25～35，复制海马神经元AD细胞模型，研究海马神经元细胞的存活和TNF－α、TNF－β，IL-1α，IL-1β，IL-6 ，NF-κB的表达，运用脑脊液药理学方法，研究改良三甲散高、中、低剂量对上述研究指标的影响。

本项目以抗炎反应为切入点，从整体和细胞两方面在分子、基因水平研究AD的炎性反应机制和改良三甲散的抗炎效应。.1.整体实验研究.在大鼠腹腔注射D-Gal使其急性衰老的基础上，一次性缓慢双侧海马内注射Aβ1-42和Ibo来制作AD模型，以行为学，神经细胞形态学，大鼠海马、皮层β-淀粉样前体蛋白（APP）的表达，大鼠海马、皮层IL-1α、IL-1β、IL-6、NF-κB、TNF-α、TNF-β炎性因子，TNF-αG252A、TNF-β G252A基因多态性表达，丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）表达为研究指标进行研究。通过水迷宫和跳台实验研究发现，改良三甲散对AD大鼠学习记忆能力有改善作用。形态学研究发现改良三甲散能减轻星形胶质细胞、小胶质细胞的变性。免疫组化法研究发现改良三甲散能降低实验大鼠脑组织APP的表达量，抑制Aβ的沉积。运用免疫组化法研究改良三甲散对AD大鼠海马、皮层IL-1α、IL-1β，IL-6，TNF-α、TNF-β，NF-κB表达的影响，发现改良改良三甲散能降低IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α、TNF-β，NF-κB的表达，表明改良三甲散可减轻AD大鼠脑内的炎症反应。进一步的研究发现改良三甲散对AD大鼠脑内TNF-α G252A、TNF-β G252A基因多态性具有一定调控作用，提示改良三甲散可在基因水平影响AD的炎症反应。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径是介导细胞反应的重要信号系统，MAPK信号传导通路参与了AD的病理性改变，研究发现改良三甲散能抑制p-JNK和p-MEK基因的表达，对p-P38的表达无影响，提示改良三甲散可以作用于MAPK途径，延缓AD病变进程。.2.细胞实验研究.取新生2天的SD乳大鼠海马组织，培养海马神经元细胞。加入经老化处理的Aβ25-35(控制终浓度为5μmol/L)，建立Аβ诱导的海马神经元细胞损伤模型，作为AD的细胞模型。运用脑脊液药理学方法和酶联免疫吸附测定法（ELISA）研究改良三甲散对大鼠海马AD细胞模型IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α、TNF-β和NF-κB的影响，发现改良三甲散对上述炎症因子具有一定的抑制作用，提示改良三甲散含药脑脊液对Aβ25-35所致海马神经元细胞损伤的炎症反应有抗炎作用。