肉苁蓉苯乙醇苷类成分抗肝纤维化作用及分子机制研究

Previous studies have shown that phenylethanoid glycosides from Cistanche (CPhGs) could effectively scavenge free radicals, reduce lipid peroxidation, restore the balance of Th1/Th2 cells, regulate the expression of apoptotic gene Bcl-2/Bax, inhibit the expression of HBsAg and HBeAg and HBV DNA replication. This project aims to study anti-hepatic fibrosis effect of CPhGs and its mechanism by bovine serum induced rat immunic hepatic fibrosis model in vivo and HSC-T6 cell line in vitro. The studies will reveal effect target of CPhGs and clarify its molecular mechanism of anti-hepatic fibrosis by observing the influence of CPhGs on proliferation and apoptosis of HSC-T6,secretion of collagen, and TGF-β1/Smad and PDGF/ERK1/2 signal transduction pathways in HSC-T6, The results provide a theoretical basis for the further expansion of desert plant Cistanche in the medical field as well as development of new drugs on prevention and treatment of liver fibrosis.

前期研究显示传统补肾益气中药肉苁蓉所含的苯乙醇苷类成分（CPhGs）能有效清除自由基、降低脂质过氧化产物生成、恢复Th1/Th2细胞的平衡、调节凋亡基因Bcl-2/Bax的表达以及抑制HBsAg和HBeAg的表达和HBV DNA的复制等作用发挥抗肝炎作用。本项目拟继续深入探讨CPhGs的抗肝纤维化作用：采用牛血清诱导的免疫性肝纤维化模型，在整体水平考察CPhGs对大鼠免疫性肝纤维化的作用；体外选用HSC-T6细胞株，通过观察CPhGs对HSC-T6增殖、凋亡和胶原分泌的作用，以及对TGF-β1 /Smad和PDGF/ERK1/2信号传导通路的影响，揭示其作用靶点；并从细胞和分子水平阐明其抗肝纤维化的分子机制。研究结果可为进一步拓展沙生植物肉苁蓉在医疗领域的应用以及预防和治疗肝纤维化新药的开发提供理论依据。

项目的背景：中草药防治肝纤维化是我国的特色和优势，本研究对肉苁蓉苯乙醇总苷（CPhGs）防治肝纤维化的疗效及其可能的机理进行研究，为进一步推广与开发应用CPhGs提供相关实验依据。主要研究内容：体内观察CPhGs对BSA诱导的免疫性肝纤维化大鼠的影响，分析血清学指标、肝组织病理及免疫组化指标，评价CPhGs抗肝纤维化的作用。体外观察CPhGs对HSC的增殖和凋亡及对细胞活力的影响，从细胞学水平阐述CPhGs抗肝纤维化的作用；研究CPhGs对TGF-β1/smad和PDGF/ERK1/2信号通路的影响，探讨其抗肝纤维化的作用靶点，从分子水平阐明其作用的分子机制，为其进一步新药开发提供基础数据。重要结果及关键数据：1）CPhGs高、中、低剂量组均能不同程度降低肝纤维化大鼠的肝、脾指数，改善血清肝功能酶指标，降低血清肝纤维化标志HA、LN、PCIII、IV-C含量，降低肝纤维化大鼠肝组织HyP含量、血清TGF-β1含量，减轻肝细胞变性及炎性细胞浸润，抑制胶原纤维的合成与沉积，下调TGF-β1的表达，使ECM的合成减少。2）CPhGs（25、50、100 μg/mL）给药组能明显抑制HSC的增殖，减少HSC的分泌量；对HSC细胞及正常肝细胞HL7702基本上无细胞毒性；使HSC细胞中NF-κB p65、α-SMA mRNA表达下调，capase 3 mRNA表达上调；使Bcl-2/Bax的比值下降。3）CPhGs呈时间与剂量依赖性地抑制TGF-β1及rrPDGF-BB刺激的HSC细胞的增殖；并能通过TGF-β1 /smad通路对TGF-β1刺激的HSC细胞中smad2、smad3、smad7 mRNA和蛋白表达产生调控；通过PDGF/ERK信号通路下调PDGF刺激的HSC细胞中ERK1/2、α-SMA、c-fos、c-jun、Collagen I mRNA表达，阻断Erk1/2、P-Erk1/2和Collagen I 蛋白表达。科学意义：采用整体动物实验和体外细胞实验相结合的方法，研究CPhGs抗肝纤维化的作用效果及可能的作用机理，揭示CPhGs多环节、多靶点、多阶段、多途径的协同靶向作用，为进一步推广与开发应用CPhGs提供相关实验依据；同时对提高肉苁蓉产品的附加值，推动新疆特色沙漠产业的发展，促进群众脱贫致富，具有重要的经济意义和社会意义。