干预免疫识别抑制大鼠肝移植排斥反应的实验研究

如何兼顾抑制移植排斥反应和保护受体免疫功能是器官移植面临的重大问题。受体针对移植物的免疫识别是排斥反应的始动因素，有效干预免疫识别将有助于更好控制排斥反应。项目组前期研究确定了CⅡTA和MyD88作为免疫识别的关键基因，并初步验证了通过干预免疫识别减轻排斥反应研究思路的可行性；纳米载体具有转染效率高和生物安全性的优势，且在体内转染中有肝脏富集的特性，项目组已构建针对靶基因的载shRNA纳米阳离子高分子脂质体。据以上基础，本项目针对排斥反应最初免疫识别阶段，采用纳米载体介导的RNA干扰技术，通过基因转染沉默移植物CⅡTA 和MyD88基因表达，获得持久、高效、稳定的干预免疫识别效果，建立高应答大鼠同种异体原位肝移植模型，不干预受体，观察对排斥反应的抑制作用。通过本研究可望获得更理想的排斥反应抑制效果，改变当前以牺牲受体免疫功能为代价的免疫抑制治疗，为临床提供新的研究方向和治疗方案。

本项目按预期进度顺利进行，取得了相应的研究结果，现汇报总结如下：.体外实验部分：项目组确定了CⅡTA和MyD88作为免疫识别的关键基因，并通过纳米阳离子高分子脂质体载体介导的RNA干扰技术及基因转染技术显著沉默大鼠骨髓源树突状细胞（DC）的CⅡTA和MyD88基因表达，获得持久、高效、稳定的干预效果，为后续体内实验提供了依据。.体内实验部分：通过纳米阳离子高分子脂质体介导的RNA干扰技术，经门静脉注射方法体内转染大鼠肝脏，通过RT-PCR及蛋白印迹等分子生物学手段检测转染后大鼠肝脏CⅡTA和MyD88基因的表达水平。研究结果显示实验组CⅡTA和MyD88基因的表达水平显著下降，表明靶向阳离子高分子脂质体载体经门静脉注射方法体内转染大鼠肝脏，可显著抑制目标基因的表达，本部分实验为后续动物模型实验奠定了基础。.动物模型部分：构建高应答大鼠同种异体原位肝移植模型，采用经门静脉注射的方法干预供体大鼠肝脏，干预后3天取肝脏进行肝移植，通过分子生物学方法检测移植后相关细胞因子水平，并检测移植后大鼠肝功能、排斥反应病理分级及大鼠存活时间。实验结果显示，大鼠血液CD4/CD8比例以及细胞因子IL-2和IFN-γ水平均显著降低，ALT、AST和TBIL也显著降低，排斥反应病理分级明显减低，大鼠存活时间明显延长。研究结果表明高应答大鼠同种异体原位肝移植模型是研究肝移植排斥反应的理想动物模型，依此方法干预供体移植物，降低了供体肝脏的免疫原性和移植物本身固有免疫能力，进而减轻了移植肝脏的排斥反应，延长了受体大鼠的生存期，为移植排斥研究和临床治疗提供了新思路。