μ-阿片肽受体在人工诱导的IBD大鼠模型中的变化规律及作用

炎症性肠病（IBD）是近年来在我国及欧美诸多国家极为普遍的一种自身免疫性疾病。免疫紊乱在IBD发生发展中起着重要作用。中枢神经系统是神经内分泌免疫调节网络中的一个核心部分，在维持机体神经内分泌免疫网络稳态方面发挥着主导作用。阿片肽是一类重要的脑肠肽，在沟通神经与免疫、胃肠等系统之间的信息中发挥重要作用。脑啡肽、内啡肽、强啡肽等阿片肽，通过μ-阿片肽受体（MOR）参与胃肠活动、免疫机能等生理过程的调节。因此，探讨MOR在大鼠炎症性肠病中的变化规律及其作用机制，具有重要的理论与实际意义。本项目拟以人工诱导的IBD大鼠为模型，利用脑立体微量注射、免疫组化及RT-PCR等技术，探讨MOR在IBD大鼠疾病发生发展过程中，下丘脑、胸腺、脾脏、外周血淋巴细胞、结肠等部位的变化规律及其作用，以期为炎症性肠病的防治提供新的思路，为丰富神经内分泌免疫网络理论提供实验依据。

本项目以人工诱导的IBD大鼠为模型，利用Western-Blot、酶联免疫及RT-PCR等技术，从神经-内分泌-免疫网络与机体免疫稳态调节的角度出发，探讨了MOR在IBD发生、发展中不同组织部位的变化规律。结果表明，从模型建立第0天到第30天，IBD大鼠下丘脑，脾脏，外周血淋巴细胞中MOR先升高，后降低的趋势，与疾病发展过程相关。IBD大鼠结肠中MOR在IBD病程中呈先降低后升高的趋势，与疾病的发展过程呈负相关。利用ELISA检测了IBD大鼠脑脊液和血液中β-内啡肽和强啡肽的浓度，发现随着疾病的发展，特别在疾病相对严重的第3天和第7天，血清和脑脊液中β-EP以及Dyn浓度都不同程度地发生降低。基本完成申请书中内容。同时，利用IEC-6细胞系和CaCO2细胞系检测了不同浓度MOR配体在不同处理时间对于IEC-6、CaCO2细胞系紧密连接蛋白Claudins、Occludin和TJP表达的影响，结果显示，盐酸吗啡和β-内啡肽都可以提高体外培养IEC-6细胞系Claudin3，Claudin5和Claudin9的表达，从而影响肠上皮细胞的通透性及黏膜屏障作用，从而影响IBD的发生发展。对人结肠上皮细胞系CaCO2细胞系研究发现，盐酸吗啡能够抑制Claudin1，Claudin2，Claudin3和Occludin的表达，β-内啡肽能够促进Claudin1，3，TJP2，TJP3和Occludin的表达，抑制Claudin2的表达。其中β-内啡肽与盐酸吗啡对部分紧密连接蛋白表达影响不一致，揭示β-内啡肽与盐酸吗啡与MOR结合能力不同，通过不同的信号途径影响紧密连接蛋白分子的表达。通过小鼠腹腔巨噬细胞的体外培养，观察了吗啡及β-内啡肽对LPS诱导的腹腔巨噬细胞分泌IL-6及TNF-α的影响，结果显示，β-内啡肽与盐酸吗啡都可以与巨噬细胞膜表面MOR结合，促进TNF-α分泌，抑制IL-6的分泌。以上结果提示，MOR受体通过与其内源性及外源性配体结合，可以影响机体免疫机能及肠上皮细胞屏障作用，从而参与对IBD发生发展的调控。