GRIP及其调节蛋白在植物细胞高尔基体上的存在与作用

以模式植物拟南芥为材料，利用从国际拟南芥中心得到的GRIP与Arl1基因的cDNA克隆，通过原核表达与亲和层析方法纯化拟南芥GRIP和Arl1蛋白；并分别制备相应的抗体。利用免疫荧光和免疫金标方法，结合共焦激光扫描显微镜和电子显微镜观察，研究GRIP和Arl1蛋白在植物细胞高尔基体上的分布和相关。利用RNAi和超表达等分子遗传学方法，改变GRIP基因在拟南芥中的表达程度，并结合高尔基体结构的荧光和电镜观察，分析GRIP蛋白在植物细胞高尔基体结构与功能方面的调控作用。利用拟南芥Arl1基因的T-DNA插入突变植株，观察其细胞内GRIP蛋白与高尔基体的相互关系，以及高尔基体结构与野生型的差异，进一步分析植物细胞内Arl1蛋白对GRIP蛋白与高尔基体结合的调控作用。希望在本项目的基础上，提出植物细胞内GRIP受小G蛋白Arl1的调控，进而作用于高尔基体成熟面结构维持及囊泡分类与分泌的新观点。