CXCL16+/-调控霍奇金淋巴瘤H/RS细胞恶性表型及免疫微环境

霍奇金淋巴瘤(HL)肿瘤性H/RS细胞恶性表型与背景细胞密切相关，趋化因子对H/RS细胞生存及免疫微环境至关重要。本组前期构建H/RS细胞模型和动物模型时挖掘出可能与HL相关的趋化因子CXCL16。本研究拟利用荧光定量PCR、ELISA等检测CXCL16在HL病例中的表达及与临床特征相关性；利用慢病毒基因转染/SiRNA干扰等构建过表达/低表达CXCL16的细胞亚系；利用增殖、侵袭、凋亡、趋化等实验结合免疫表型检测等，观察调控CXCL16表达对H/RS细胞体内外生物学特性及与免疫细胞关系的影响；并利用蛋白芯片、信号通路抗体/抑制剂等探讨上述作用的可能机制。本研究延伸和拓展了本组前期系列研究，旨在从趋化因子角度阐释H/RS细胞恶性表型形成的相关机制。鉴于淋巴瘤为炎症/免疫相关肿瘤，本研究将为基于免疫微环境的肿瘤机制研究提供实验依据，亦为临床诊断、寻找药物靶点和免疫治疗等探寻思路。

背景：前期研究发现可能与HL微环境形成密切相关的趋化因子CXCL16。CXCL16与多种炎症性肿瘤相关，但是在淋巴瘤组织中尚未见系统报道；对霍奇金淋巴瘤H/RS细胞恶性表型和免疫微环境的影响有待探讨。.主要内容：(1)80例淋巴瘤组织及9株细胞株上，免疫组化、荧光定量PCR、免疫印迹、免疫荧光和ELISA方法检测表达，发现CXCL16广泛表达于淋巴瘤组织，cHL较高表达，与肿瘤体积大小呈正相关；HL细胞株L428细胞及某些NHL细胞株（RPMI8226、KM3、Jurkat细胞）呈高表达。膜结合型(TM-CXCL16)和分泌型(sCXCL16)表达水平不同, OCI-Ly1、OCI-Ly8、OCI-Ly10、Karpass299、Jurkat、Raji 和L428细胞CXCL16 的分泌水平较高。(2)慢病毒转染、筛选和鉴定过表达CXCL16的L428细胞亚系、外源性添加分泌型人重组CXCL16蛋白（shCXCL16）或CXCR6抗体（Anti-CXCR6）以上调或阻断CXCL16的水平，经CCK8实验、Transwell小室、PI-Annexin V凋亡检测及流式细胞术等检测肿瘤细胞增殖、迁移能力及细胞周期、凋亡等生物学特性的改变，发现CXCL16可使L428细胞G1期缩短、S期延长，促进细胞增殖和迁徙，抑制细胞凋亡。(3)研究微环境作用时，流式细胞检测发现CXCL16对L428细胞的免疫表型（CD15、CD30、CD19、CD20）影响不显著。免疫磁珠法从健康人外周血分离CD4+T淋巴细胞和CD4+CD25+Treg细胞，Transwell和CCK-8实验检测CXCL16的趋化能力及共培养条件下L428和Treg细胞的增殖，发现CXCL16可增强CD4+T细胞和CD4+CD25+Treg细胞的趋化能力，共培养条件下Treg细胞和L428细胞可互相促进增殖。(4)IHC、ICC和WB检测调控CXCL16对信号通路蛋白表达的影响，发现cHL中pAKT、pP70S6和pIκB表达水平升高，CXCL16可激活L428细胞AKT/mTOR及NFκB信号通路。.意义：本研究延伸了前期研究，系统的报道了CXCL16在淋巴瘤组织的表达，从趋化因子角度阐释H/RS细胞恶性转化、肿瘤微环境及免疫表型形成的初步机制；为基于免疫微环境的霍奇金淋巴瘤分子机制研究提供了实验依据。