下调糖酵解酶NSE抗非霍奇金淋巴瘤的作用及机制

The overall management effect for non-Hodgkin's lymphoma is still poor, so it is necessary to explore new targets on treatment. Neuron-specific enolase (NSE) is a key glycolytic enzyme, closely associated with malignant tumors.Our previous studies showed that it was expressed in any histological subtype of NHL, and the outcome was significantly worst in the NSE increased group than in the NSE normal group.And pretreatment serum NSE level was taken as an independent prognostic factor for NHL. Furthermore, we found that RNA interference which is used to silence NSE gene can inhibit NHL cell proliferation, but the mechanisms are unclear. To solve the scientific problem,this project is to take the DoHH2 human B lymphoma as targeted cells and establish the subcutaneous transplanted tumor model in the CB-17SCID mice, then explore the change of glycolytic levels,key enzymes and mitochondrial membrane potentials as well as cell cycle, apoptosis and growth pathway through various molecular biological techniques when NSE activity is modified by different expressing plasmid , which subsequently will clarify the exact mechanism of inhibiting proliferation of lymphoma cells and develop a valuable strategy for seeking new management targets on the lymphoma.

非霍奇金淋巴瘤（NHL）总体治疗效果欠佳，有必要寻找新的治疗靶点。神经元特异性烯醇化酶(NSE)是一种关键的糖酵解酶，与恶性肿瘤关系密切。我们前期临床研究表明，它在NHL各病理亚型中高表达,且血清NSE水平与治疗反应性相关，治疗前血清NSE水平是NHL患者独立的预后因子。此外，在体外实验中，我们应用RNA干扰技术初步发现沉默NSE基因能抑制NHL细胞的增殖，但是，具体机制尚不清楚。为此，本项目拟在细胞及动物水平，采用不同的表达质粒改变NSE酶活性，借助激光共聚焦、PCR、western-blot等分子生物学技术，探索酶活性改变对细胞、移植瘤生长和糖酵解途径等的影响，以及与细胞周期、凋亡、生长通路改变的关系，从而阐明以NSE为靶点抗淋巴瘤的作用及确切机制，为开辟淋巴瘤治疗的新方向提供理论依据。

弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是一种常见的高度恶性和异质性的非霍奇金淋巴瘤（NHL）, CD20单抗分子靶向治疗明显改善了患者的总生存和无病生存，但是肿瘤耐药和肿瘤复发问题仍然给淋巴瘤的治疗带来了挑战性。神经特异性烯醇化酶（NSE）是烯醇化酶家族中的一员，在糖酵解途径中发挥重要功能， NSE在小细胞肺癌及神经内分泌相关的肿瘤中普遍高表达，是提示预后差的肿瘤标志物。研究发现肿瘤免疫微环境与肿瘤耐药和肿瘤进展相关，巨噬细胞在肿瘤免疫微环境中起到非常重要的作用。巨噬细胞可以分为M1和M2型，越来越多的研究证明肿瘤相关性的巨噬细胞为M2型，具有促进肿瘤发生发展及肿瘤耐药的作用。我们前期研究发现外周血和淋巴瘤组织中高表达的DLBCL患者临床治疗效果较低表达NSE患者差。NSE在肿瘤细胞的促肿瘤机制目前并不明确，本课题主要在B细胞淋巴瘤的细胞及动物水平中采用不同的表达质粒改变NSE蛋白的表达，探索NSE蛋白表达改变对细胞、移植瘤生长和淋巴瘤肿瘤微环境等的影响，并进一步探索具体的机制，从而阐明以NSE为靶点抗淋巴瘤的作用及机制。研究发现NSE在淋巴瘤细胞株中高表达，NOD/SCID小鼠体内实验发现NSE过表达可以促进肿瘤的增殖，干扰NSE可以明显减少肿瘤体积，同时过表达NSE可以促进淋巴瘤相关的巨噬细胞的M2型极化。研究过表达和敲除NSE后的DLBCL细胞与巨噬细胞THP1共培养后检测THP1的变化，结果提示过表达NSE的DLBCL细胞可以促进THP1细胞的M2型极化，增加THP1的趋化能力；NSE过表达的DLBCL与THP1共培养可增加P50的核转位及减少p65的核转位；NSE参与调控THP1细胞NF-κB通路的功能抑制；与巨噬细胞共培养条件下，下调NSE可以抑制淋巴瘤细胞的增殖，促进凋亡。研究结果为开辟淋巴瘤治疗的新方向提供理论依据。