老年性EB病毒阳性DLBCL致病基因的筛选及克隆异质性研究

Newly found immunosenescence- related lymphoma,EBV positive DLBCL of the elderly is one of the actived B-cell DLBCL, possing the characteristics of high frequency of invasiveness and replase,lower response to standard chemotherapy.So far, there are no any study on the mechanism of pathogenesis and clonal heterogeneity for this lymphoma.High resolution of array comaparative genomic hybridizaiton(aCGH)is a method of identifying genomic DNA copy number alteration and screeing new tumor-associated genes.Recently we sucessfully explored the clonal heterogeneity of mantle cell lymphoma and peripheral T-cell lymphoma,not specified by this method, and also screened some new tumor-associated genes. In this study,we will detect the genomic alteration of EBV+DLBCL-E using this method,analysing the clonal heterogeneity of pathological subtypes of this lymphoma and predicting the law of clonal evolution of tumor cell, then screening the new pathogenetic gene focusing on the most frequently recurrent copy number alterations regions.In addition,gene mutation and functional analysis will also be performed for the screened genes.This study will first identify the pathogenetic genes for EBV+DLBCL-E, providing theoretical evidence for effective target-therapy.

新近发现与免疫衰老有关的淋巴瘤，老年性EBV阳性弥漫大B细胞淋巴瘤（EBV positive DLBCL of the elderly，EBV+DLBCL-E）是活化B细胞性DLBCL之一，具有高度侵袭性、易复发的特点，对标准化疗反应差。目前对此种淋巴瘤没有任何发病分子机制及肿瘤细胞克隆性的研究。高通量比较基因组杂交是一种精确鉴定全基因组DNA拷贝数变化并筛选新肿瘤相关基因方法。新近我们利用此种方法成功探索了套区淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤的克隆性及筛选了新肿瘤相关基因。本项目拟采用此方法检测EBV+DLBCL-E全基因组DNA拷贝数变化，分析不同病理亚型的肿瘤细胞克隆异质性，并预测肿瘤细胞克隆性进展规律；其次以最高频率拷贝数改变区域（CNVs）为切入点，筛选致病基因，且对筛选的基因行突变检测及功能分析。本课题将首次发现并鉴定EBV+DLBCL-E的致病基因，为有效的靶向治疗提供理论依据。

2008年WHO淋巴造血系统肿瘤分类将EB病毒感染的弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）称为老年性EBV阳性DLBCL，因多发生在老年人。结外发病率高，呈高度侵袭性、对化疗反应差。然而年轻患者病例报道也逐渐增多，但临床呈惰性，结内多见，治疗反应好。2016年WHO不再限制年龄，将老年性EBV阳性DLBCL更名为EBV阳性DLBCL（EBV+ DLBCL）。该肿瘤形态学比较广谱，分为多形性和大细胞亚型。目前对此种淋巴瘤发病的分子机制有个别研究，而且不同的年龄组及病理亚型组有无差异尚无研究，故很难制定成功的治疗方案，是目前急待解决的难题。我们采用全外显子测序的方法(WES)检测11 例EBV+DLBCL石蜡组织样品，以探索该种淋巴瘤的分子遗传学以及肿瘤异质性，寻找致病基因，比较老年患者与年轻患者的分子遗传学差异。全外显子测序结果显示，EBV+DLBCL最常见的碱基颠换为C>T/G>A。在遗传学上，不同年龄组和病理亚型组之间没有显著性差异，包括外显子区突变基因数量，SNV和indel数量。等位基因肿瘤异质性(Mutant-Allele Tumor Heterogeneity，MATH) 计分显示EBV+DLBCL具有较高肿瘤内异质性，主要的mutation signature为signature3 型，即与同源重组主导的DNA双链断裂修复功能缺陷有关。筛选了57个高频突变基因，包括前五位LNP1, PRSS3, MUC3A, FADS6, TRAK1基因，以前均无报道过。虽然没有探索新的信号通路，我们把WES结果比对分析NF-KappaB和 JAK-STAT通路，结果显示EBV+ DLBCL中，不同比例样本出现与两条通路相关的一个或几个基因突变。 综合以上，研究显示EBV+DLBCLs具有很大的肿瘤异质性，有必要对该种淋巴瘤采取个体化治疗方案，以提高该类肿瘤的疗效和预后。