大肠间充质干细胞在炎症性肠病肠粘膜修复及粘膜免疫调节中的作用

间充质干细胞（MSCs）是一种具有多极分化能力的祖细胞，该细胞能通过分泌生长因子,分化为成纤维细胞等多种细胞参与局部损伤的修复。此外，MSCs还具有较强的免疫抑制作用，如抑制T细胞增生、诱导T调节细胞生成等。炎症性肠病是一种免疫紊乱性疾病，表现为肠道粘膜T细胞功能紊乱，促炎细胞因子产生过度，局部炎症经久不愈。因此补充MSCs既可加强损伤粘膜的修复，又能抑制局部过强的免疫反应。我们前期研究已经成功分离、培养出结肠粘膜MSCs；并将其注入小鼠体内,发现该细胞可定植于肠道溃疡基底。本研究拟继续观察结肠MSCs对肠道炎症的影响，及MSCs对肠系膜淋巴结T细胞增生、细胞因子分泌的影响。通过该研究我们希望能证实结肠MSCs能促进肠道粘膜上皮细胞增生，抑制肠道T细胞增生，抑制Th1细胞因子的分泌。该研究的意义在于进一步阐明确肠道粘膜的修复机制，肠道粘膜免疫的调节机制，进而为IBD的治疗提供新的方向。

本研究已经成功分离和传代小鼠结肠间充质干细胞（MSCs）。结果显示小鼠MSCs在传代后第六天呈长梭形，细胞聚集呈“旋涡”状。成骨诱导显示细胞内可见有少量的橘红色胞外基质沉积，成脂诱导后可见胞内有着色的脂滴。流式检测显示CD29、CD44、CD105阳性， CD11b、CD31、CD34阴性。分离TNBS小鼠MLNs中的T淋巴细胞，将T细胞分别单独培养（alone）、与结肠MSCs经transwell小室共同培养以及直接接触（contact）培养， 3天后分别测定T淋巴细胞增生、凋亡、细胞周期，细胞因子和Treg细胞的表达。结果显示T淋巴细胞与MSCs经transwell小室非接触共同培养以及直接接触培养后，小鼠结肠MSCs可抑制T淋巴细胞的增殖，能将激活的T淋巴细胞细胞周期阻滞在G0-G1期，使细胞处于失能状态，同时Tregs 细胞的百分比明显增加，IFN-γ和TNF-α水平明显下降，IL-10水平明显上升，说明MSCs可以通过下调促炎症因子发挥免疫抑制作用。结果还显示：T淋巴细胞与MSCs经transwell小室非接触共同培养以及直接接触培养后，上清液中PGE2水平明显上升。加入吲哚美辛后，在transwell培养组和直接接触培养组中PGE2水平明显下降， T细胞增生分别由7.90%±1.70%上升至32.20%±3.68%（经transwell培养）和由6.55%±1.34%升至30.40%±1.41%（直接接触培养）（P<0.05）。本次实验还显示将MSCs注入小鼠体内后小鼠体重恢复较快，生存率高于TNBS组,第6天的组织学肉眼评分及病理评分都明显低于TNBS组小鼠。流式法检测CFSE标记的MSCs在各组织的表达情况：CFSE标记的MSCs在MSCs治疗组小鼠病变结肠的数量为17.62%，在小鼠正常结肠的数量为12.83%，而在TNBS小鼠结肠为7.76% ；CFSE标记的MSCs在MSCs治疗组腹腔淋巴结数量为9.32%，脾脏为8.54%；而在TNBS小鼠腹腔淋巴结为1.81%；脾脏为2.04%。