兔出血症病毒VP60重组蛋白颗粒展示系统可行性研究

兔出血症病毒（RHDV）是杯状病毒科成员，结构简单，仅有一个主要结构蛋白，研究发现RHDV在兔体内可以诱导机体产生很强的体液免疫应答、细胞免疫应答和粘膜免疫应答，而且RHDV还有极强的诱导干扰素产生的能力。为了探究兔出血症病毒样颗粒（RHDV-VLPs）容纳外源抗原决定簇的能力，本项目对该病毒结构蛋白VP60基因进行不同位点的缺失，在缺失部位插入T细胞抗原表位，通过杆状病毒表达系统构建一系列RHDV-VLPs，用透射电镜技术、免疫学技术结合生物信息学等方法对VLPs的形成、VLPs所展示表位的长度、构象、抗原性等方面进行检测，以评价RHDV-VLPs作为展示系统的可行性，为RHDV 衣壳蛋白的形成机理及RHDV-VLPs相关研究提供参考依据。

兔出血症病毒（RHDV）是杯状病毒科成员，结构简单，仅有一个主要结构蛋白，研究发现RHDV在兔体内可以诱导机体产生很强的体液免疫应答、细胞免疫应答和粘膜免疫应答，而且RHDV还有极强的诱导干扰素产生的能力。为了探究兔出血症病毒样颗粒（RHDV-VLPs）容纳外源抗原决定簇的能力，本项目对该病毒结构蛋白VP60基因进行不同位点的缺失，在缺失部位插入T细胞抗原表位，通过杆状病毒表达系统构建一系列RHDV-VLPs，用透射电镜技术、免疫学技术结合生物信息学等方法对VLPs的形成、VLPs所展示表位的长度、构象、抗原性等方面进行检测，以评价RHDV-VLPs作为展示系统的可行性，获得了一系列研究成果：（1）RHDV-VLPs在N端和C端均具有多个可插入及替换的位点和区域，且这些位置氨基酸的变化不影响VLPs的形成，只有直接缺失196-207位氨基酸的嵌合蛋白不能形成可见VLPs；（2）RHDV-VLPs N端一系列单T细胞表位替换的嵌合株中，VP60第196-228位氨基酸区域是携带外源T细胞表位的较优区域；（3）RHDV-VLPs C端一系列单T细胞表位替换的嵌合株中，VP60 C端579位氨基酸和302-309位氨基酸是携带外源T细胞表位的较优插入位点；（4）RHDV-VLPs 一系列双串联T细胞表位替换的嵌合株中，2-14位氨基酸是携带外源T细胞表位的较优插入位点。上述结果为RHDV 衣壳蛋白的形成机理及RHDV-VLPs展示系统相关研究提供参考依据。