补肾活血法调控青光眼RGCS PI3K/AKt信号转导通路的研究

In the protection of glaucoma optic nerve, the key link is retinal ganglion cells（RGCs）. Exploring the effect of PI3K/Akt (phosphor-lipin acid radical inositol 3 kinase/serine/threonine protein kinase) signal pathway in RGCs' apoptosis processes is a new and efficient research techniques of glaucoma RGCs damage. In this study, Bushenhuoxue is used in the glaucoma RGCs protection research, focusing on the RGCs to research the protective effects of Bushenhuoxue to RGCS glaucoma model. Intervene SD rat model of chronic elevated intraocular pressure with QiJu Dihuang Pills and Compound Danshen Tablets which are representative drugs of Bushenhuoxue and SD suckling mouse RGCs apoptosis model which Pressure cultured in vitro with medicated serum. Through the expression of the PI3K/Akt signal pathway's main members and the Related substrate factor together with the analysis of Enzyme activity, to clarify the influence of PI3K/Akt signal pathway's mechanism in RGCs' apoptosis processes and the intervention of Bushenhuoxue.

青光眼视神经保护的关键环节是视网膜节细胞（retinal ganglion cells ，RGCs）。探索PI3K／Akt（磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶）信号通路在RGCs凋亡过程中的作用，是青光眼RGCs损害高效新颖的研究手段。本项目将补肾活血法应用于青光眼RGCs保护研究，以RGCs为核心研究补肾活血法对青光眼模型RGCs的保护作用。用补肾活血法代表方药杞菊地黄丸和复方丹参片干预SD大鼠慢性高眼压模型，含药血清干预体外加压培养的SD乳大鼠RGCs凋亡模型，通过对PI3K／Akt信号转导通路主要成员及相关底物中与凋亡有关的因子的表达及酶活性进行分析，阐明PI3K/Akt信号通路在RGCs凋亡过程中的作用机制及补肾活血法干预的影响。

视网膜神经节细胞（RGCs）是青光眼视神经保护关键环节。探索PI3K／Akt信号通路在RGCs凋亡过程中的作用，是青光眼RGCs损害保护高效新颖研究手段。本项目以RGCs为核心，研究补肾活血法（杞菊地黄丸+复方丹参片）对青光眼模型RGCs的保护作用。从体内、体外实验对PI3K／Akt通路与凋亡有关的因子进行分析，阐明PI3K/Akt通路在RGCs凋亡过程中的作用及补肾活血法的干预机制。.体内实验用补肾活血法干预SD大鼠慢性高眼压模型：（1）上调PI3K/Akt通路凋亡抑制因子NF-kB、Bcl-2、p-Akt：给药组均阳性表达最高， 与对照组和模型组相比，差异均有统计学意义（P＜0.01）；（2）下调PI3K/Akt通路凋亡促进因子Caspase-9、Bad：模型组阳性表达最高，与对照组及给药组相比，差异均有统计学意义（均P＜0.01 or P<0.05）。（3）增加视网膜厚度，提高RGCs数量、改善RGCs超微结构。.体外实验用补肾活血法含药血清干预加压培养SD乳大鼠RGCs凋亡模型：（1）制备SD大鼠补肾活血含药血清。（2）首次用PLC-MS/MS法测定SD大鼠补肾活血含药血清主要成分浓度：丹参酮II 0.6-1.7ng/ml、三七皂苷R1 335.3-2226.5pg/ml、丹皮酚11.8-19.1ng/ml、泽泻醇A 4.1-10.8ng/ml。（3）建立SD乳大鼠培养RGCs模型。（4）建立加压培养RGCs模型：20mmHg培养RGCs 12h以上对RGCs造成损伤，80mmHg 24h细胞凋亡率最高。（5）含药血清（5、10、20%）对加压培养SD乳大鼠RGCs模型干预机制，均以20%效果明显：①抑制RGCs凋亡；②上调凋亡抑制因子PI3K、Akt、NGF的mRNA及蛋白表达，CREB的mRNA表达；③下调凋亡促进因子caspase-3、ASK1、Forkhead的mRNA及蛋白表达、BAD蛋白表达。.本研究为青光眼RGCs保护创新了新思路、提供了“补肾活血”新方法。