补肾活血方调控Th17细胞亚群诱导PI3K/AKT通路治疗URSA的机制研究

Researches have shown that activation of parts cytokines of Th17 and suppression of PI3K/AKT signaling pathway are correlated with URSA, and Tonifying Kidney and Promoting Blood Circulation Decoction has curative effect on the treatment of URSA. Based on previous work,methods of ELISA、SiRNA transfection 、serum pharmacology、RT-PCR、western blotting、etc will be used to clarify the regulatory mechanism of Tonifying Kidney and Promoting Blood Circulation Decoction on URSA by regulation of PI3K/AKT signaling pathway induced by Th17 cytokines both from experimental and clinical aspects,which following the guidance of tonifying kidney and promoting blood circulation method. In addition, HPLC、LC-MS method will also be used to clarify effective ingredients of tonifying kidney and promoting blood circulation decoction .Effect of effective drugs serum of tonifying kidney and promoting blood circulation decoction、flavonoids from semen cuscutae and tanshinone II A on human decidual cells of URSA will clarify pathogenesis of URSA caused by suppression of PI3K/AKT induced by Th17 cytokines .This study aimed to lay the foundation for the clinical application of Tonifying Kidney and Promoting Blood Circulation Decoction and traditional Chinese herbal monomer from the aspects of the cytokines and signaling pathway.

前期研究表明，Th17细胞亚群部分细胞因子的激活、PI3K信号通路的抑制与不明原因复发性流产（URSA）的发生具有相关性，补肾活血方对URSA疗效确切。本课题在前期工作基础上，采用ELISA、SiRNA转染、RT-PCR、Western blotting等方法，从实验及临床两方面阐明在补肾活血法指导下，补肾活血方对Th17细胞亚群诱导PI3K/AKT通路引起URSA的调节机制；此外该研究应用HPLC、LC-MS等方法，予补肾活血方有效组分药物血清、菟丝子黄酮及丹参酮ⅡA对URSA人体外蜕膜细胞进行干预, 进一步明确Th17细胞亚群通过PI3K/AKT通路致URSA的发病机制及补肾活血方的有效代谢成分，从细胞因子信号传导通路方面，为补肾活血方及中药单体在本病的临床应用奠定基础。

Th17细胞亚群主要分泌因子调控PI3K/AKT通路引起URSA，其机制为：高表达的 Th17 细胞亚群主要分泌因子识别DSCs表面细胞因子受体抑制 PI3K/AKT 通路，调控通路 PTEN、Bcl-xl 等因子水平从而导致蜕膜细胞异常凋亡而引起病理妊娠，最终导致流产的发生。本研究结果表明：（1）URSA 妊娠失败患者外周血及蜕膜组织中TH17亚群分泌的细胞因子IL-17的水平异常，引起各类致炎细胞因子在URSA患者外周血及蜕膜组织中的表达异常，从而诱导URSA的发生。（2）URSA 妊娠失败的发生与患者蜕膜组织中PI3K通路上相关蛋白P110 和 Bcl-xl的低表达有关。（3）补肾活血方可有效调节IL-17E表达升高，下调IL-17A水平在适当的范围内以利于URSA妊娠继续。（4）补肾活血方可以提升蜕膜组织中PI3K通路活性，降低复发性流产小鼠模型的流产发生率，具有明显的保胎安胎作用。（5）URSA患者DSCs存在异常凋亡情况，可能是流产发生的原因之一，Th17 分泌的效应分子 IL-17A，通过激活PI3K/AKT通路可促进DSCs增殖活性。（6）补肾活血方能够稳定IL-17A对于DSCs增殖活性，并能够抵消PI3K抑制剂DSCs增殖的抑制作用，从而使DSCs恢复正常状态，上调了肾虚血瘀型URSA患者DSCsIL-17RA的表达，使IL-17A能够与其结合激活PI3K/AKT通路从而促进DSCs增殖，最终达到治疗URSA的作用。