益气活血化痰法调控PI3K/AKT通路促进脑缺血后神经再生机制研究

本研究基于中风病"气虚痰瘀"病机理论，提出"益气活血化痰法通过调控PI3K/AKT通路促进脑缺血后神经再生"的假说。选用大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型以及体外培养神经干细胞模型, 以神经再生为切入点，从PI3K/AKT信号转导的途径入手，借助免疫组化、原位杂交、血清药理学、体外细胞培养、以及免疫荧光技术、免疫印迹等方法，采用在体和离体相结合综合评价,并结合图像分析，观察神经可塑性指标（促进因子SYP、GAP-43、MAP-2和抑制因子Nogo-A蛋白）、信号传导通路指标（NGF、PI3K/AKT及下游Bad蛋白、CASPASE-9、IKK）、神经干细胞指标（NSE、Nestin、Brdu、GFAP），揭示益气活血化痰法促进神经再生的作用机制，为中医药干预神经再生和功能重建研究提供理论基础和实验依据。

本研究基于中风病"气虚痰瘀"病机理论，提出"益气活血化痰法通过调控PI3K/AKT通路促进脑缺血后神经再生"的假说。研究中观察了益气活血中药复方对脑缺血再灌注损伤后神经可塑性以及细胞存活信号通路PI3K／AKT及NGF、Bad蛋白的影响。结果表明，益气活血法能促进SYP、GAP-43以及MAP-2的表达，有利于脑缺血后突触重塑和神经细胞轴突的再生,促进脑卒中后神经功能恢复，其作用机制可能与促进NGF表达，激活PI3K/Akt通路并降低Bad蛋白表达有关。.同时，研究中应用免疫组化的方法，观察了益气活血化痰法中药复方对脑缺血再灌注损伤后SYP、GAP-43、MAP-2蛋白表达的影响。研究结果表明，益气活血化痰法能够保护脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织，促进SYP和GAP- 43及MAP-2蛋白表达，促进脑卒中后神经功能恢复。应用Western blot的方法，观察益气活血化痰法药物对脑缺血再灌注损伤后NGF及BAD，P-AKT和AKT的影响。结果表明益气活血化痰法能促进NGF蛋白表达，同时降低BAD蛋白表达，起到神经保护的作用。其作用机制可能与益气活血化痰法药物上调细胞存活信号通路PI3K／Akt有关。.体外实验中，采用细胞培养、血清药理学、免疫荧光等技术，观察益气活血化痰药物血清对大鼠NSC生长分化的影响。研究结果证实益气活血化痰药物对神经干细胞无毒性，并且能促进神经干细胞分化，NES和GFAP阳性细胞数也明显增加，其作用机制可能是通过PI3K-AKT通路作用。同时，体外神经干细胞培养分离后，采用TUNEL试剂盒检测细胞凋亡，免疫荧光法检测Brdu含量。结果表明益气活血化痰药物血清能促进NSC 生长分化增殖并且抑制凋亡。并应用Western blot的方法，检测了益气活血化痰药物血清对神经干细胞PI3K/AKT信号途径的影响。结果表明，益气活血化痰药物血清能够上调PI3K／Akt通路，下调下游因子BAD、IKK、CASPASE-9蛋白的表达，从而起到神经保护的作用。.本研究严格按照计划任务书进行，取得了预期成果。研究结果进一步丰富了中医治则治法研究，补充发展了中医脑病研究内容，为中医药干预神经再生和功能重建研究提供了理论基础和实验依据。.