基于PI3K/Akt/mTOR通路研究补肾活血法修复雷公藤致卵巢损伤的分子机制

卵泡发育障碍常引起月经稀少、闭经、卵巢早衰、多囊卵巢综合征、不孕等妇科疑难病症，其临床发病率居高不下，无论中医西医均感棘手。补肾活血法是促卵泡发育的临床经典治法之一，但其现代科学生物学基础尚未阐明。在前期系列研究发现补肾活血法对雷公藤多苷致卵巢损伤小鼠和大鼠模型卵巢中各级卵泡和黄体数，细胞凋亡因子TNF-a/TNFR-1、Caspase 3及ER，血中INHB、IGF-1，血管VEGF/Flk-1、Endostatin表达有调节作用的基础上，本项目紧扣与卵泡发育密切相关的PI3K/Akt/mTOR信号通路这一研究前沿，拟采用细胞生物学、分子生物学等现代科技手段，借用雷公藤多苷大鼠模型，结合在体动物实验与离体细胞培养，深入探索补肾活血法促卵泡发育的分子机制。其成果有望阐明中药调控生殖内分泌与促卵泡发育的关键科学问题，亦可为雷公藤生殖毒性的防治提供参考，因此具有重要科学意义和实际应用价值。

卵泡发育障碍常引起月经稀少、闭经、卵巢早衰、多囊卵巢综合征、不孕等妇科疑难病症，其临床发病率居高不下，无论中医西医均感棘手。补肾活血法是促卵泡发育的临床经典治法之一，但其现代科学生物学基础尚未阐明。本项目紧扣与卵泡发育密切相关的PI3K/Akt/mTOR信号通路这一研究前沿，采用细胞生物学、分子生物学等现代科技手段，借用雷公藤多苷大鼠模型，结合在体动物实验与离体细胞培养，深入探索补肾活血法促卵泡发育的分子机制。主要研究结果：（1）雷公藤多苷75mg/kg•d剂量连续灌胃4周，成功建造卵泡发育障碍大鼠模型。（2）体外培养48 h后颗粒细胞生长旺盛可获得较高的细胞存活率。 (3) 80mg/kg•d雷公藤多苷含药血清作用于体外培养大鼠卵巢颗粒细胞，能获得与顺铂相同的抑制效果。 (4)补肾活血中药新加归肾丸可能通过上调p-AKT的表达，增强PI3K/AKT信号通路的活性而解除雷公藤多苷的抑制作用，一方面促使mTOR、p70S6K活化，下传有丝分裂信号，使颗粒细胞cyclinD1、 cyclinD2表达增多，促进细胞周期进程，上调PCNA、PCNAmRNA、Bcl-2、Bcl-2mRNA、XIAP、XIAPmRNA的表达，促进颗粒细胞增殖；上调抗凋亡因子survivin蛋白含量，抑制颗粒细胞过度凋亡，进而促进颗粒细胞E2、P的分泌。另一方面下调促凋亡因子Bax、BaxmRNA、Caspase-3、APAF-1、APAF-1mRNA、Foxo3a、Foxo3mRNA等的表达，抑制颗粒细胞过度凋亡，进而促使卵泡正常生长、发育、成熟，使受损卵巢功能得以修复。因此，补肾活血中药复方新加归肾丸可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路的活性，修复受损的卵巢颗粒细胞。这为中医妇科临床调节生殖内分泌、促卵泡发育、治疗疑难月经病的经典有效治法提供了重要的科学依据。