miRNAs调控Tiam1基因在肝癌转移中的作用机制

本课题组前期研究证明Tiam1基因高表达与肝癌患者预后不良相关，过表达/沉默Tiam1后能促进/抑制肝癌细胞增殖、侵袭和转移能力，但其具体作用机制尚未明确。近期，我们利用生物信息学方法逆向预测并结合预实验结果，认为miRNA-106b、miRNA-141可能与Tiam1基因3'UTR结合并调控其表达。为进一步探讨Tiam1基因的调控机制，本项目拟检测这2个miRNAs 在肝癌细胞株及组织中的表达情况及意义、采用luciferase 报告基因系统鉴定miRNAs对Tiam1 的直接调控作用；通过转染miRNA前体和miRNA inhibitor，体内外证实miRNAs对Tiam1的调控及其在肝癌中的功能，揭示肝癌中Tiam1基因高表达的分子机制及其与相关miRNA的相互调控关系。提出肝癌中miRNA 调控Tiam1基因的新机制，为肝癌发生发展机制及预后判断研究提供新的理论依据。

本课题组前期研究发现Tiam1是一个重要的肝癌转移相关基因，其低表达有降低肝癌细胞分裂增殖及侵袭转移能力等功能，且Tiam1的高表达是肝癌患者预后不良的标志物之一。但它在肝癌中的调控机制尚不明确。本实验将探讨参与调控Tiam1基因的miRNAs及其在肝癌侵袭、转移中的作用。.本研究探讨了参与调控Tiam1基因的miRNAs及其在肝癌侵袭、转移中的作用，利用TargetScan、DIANA-microT和miRanda三个经典的miRNA靶基因预测数据库进行相互作用miRNAs的预测，得出miR-141和miR-106b为候选miRNA；采用RT-PCR方法检测了miR-141、miR-106b和Tiam1蛋白在6种肝癌细胞株中的表达趋势，初步筛选出miR-141为Tiam1相互作用的miRNA；利用荧光素酶报告系统验证了miR-141与Tiam1的3’UTR区存在特异性结合；通过原位杂交技术检测212例有完整随访资料的肝癌组织中miR-141表达，结果显示miR-141低表达与患者预后密切相关，临床参数分析显示miR-141低表达与转移密切相关，单因素和多因素分析显示miR-141低表达可作为肝癌预后的预后因素，提示miR-141可作为肝癌预后判断的重要指标，对判断肝癌预后有重要意义；通过抑制miR-141表达后能上调低转移潜能的MHCC97L肝癌细胞内Tiam1的表达，促进肝癌细胞体外增殖、迁移及侵袭能力；转染miR-141过表达病毒后能下调高转移潜能HCCLM3肝癌细胞内Tiam1的表达，抑制肝癌细胞体外增殖、迁移、侵袭及体内皮下成瘤和转移能力。.本研究将为Tiam1在肿瘤侵袭和转移中的分子机制提供新线索，为Tiam1基因和靶点miRNAs作为新的肝癌转移分子标志物提供科学依据。.本项目发表论文5篇，SCI论文4篇。