TLR2/NOD2在内毒素致敏巨噬细胞对革兰氏阳性金黄色葡萄球菌反应性中的作用及其机制研究

革兰氏阳性（G+）菌体外促炎作用显著弱于G-菌，但G+菌脓毒症炎症反应严重程度及致死率却与G-菌脓毒症相当。已知许多G+菌脓毒症患者会合并内毒素血症，而我们也发现LPS可以使巨噬细胞中识别G+菌胞壁成分的模式受体TLR2和NOD2表达增多、同时增强巨噬细胞对G+菌反应性（致敏作用）；此外LPS与NOD2特异性配体可以协同诱导TLR2和NOD2表达。故我们推测：在LPS诱导NOD2和TLR2表达的基础上，NOD2的激活又可显著增强LPS的上述作用，从而使巨噬细胞对后续G+菌刺激的反应性进一步放大，这可能是LPS增强机体对G+菌敏感性、使得G+菌脓毒症病死率居高不下的关键原因。本项目拟首先明确TLR2和NOD2在LPS致敏巨噬细胞对G+菌反应性过程中的关键作用；然后我们将证实LPS和NOD2特异性配体可通过不同信号途径促使NFκB转录激活，这可能是他们协同诱导TLR2和NOD2表达的主要机制。

内毒素LPS可以显著增强机体对革兰氏阳性（gram-positive, G+）菌的敏感性（致敏作用），这可能是临床上很多G+菌脓毒症的病原菌本身致病性不强、但致死率却很高的原因之一。我们前期研究显示，LPS诱导TLR2和NOD2表达的作用可能是其致敏机体对G+菌反应性的重要机制之一。本研究以此为基础，采用在对巨噬细胞TLR2和NOD2分别进行干扰后检测细胞对LPS的致敏作用。同时，采用TLR2特异性激动剂和NOD2特异性激动剂，研究不同信号通路在LPS诱导细胞损伤中的作用，评价是否TLR2与NOD2在其中起到协同作用。此外，在体实验中，通过尾静脉注射干扰慢病毒，在体研究TLR2和NOD2在LPS诱导损伤中的作用。.我们研究发现，对小鼠巨噬细胞TLR2和NOD2分别进行基因沉默后，LPS的致敏作用显著受到抑制，表现为NO和炎症因子产生下降。此外，采用TLR2特异性激动剂和NOD2特异性激动剂进行的研究发现，CaM-NAFT1、MyD88-IRAK→NFB和MAPKs→AP-1信号通路参与TLR2和NOD2介导的LPS对细胞的损伤作用。在体动物实验也证实，TLR2和NOD2在LPS诱导的器官损伤中发挥了重要的作用，因为给予TLR2和NOD2干扰后小鼠LPS诱导的组织损伤显著缓解。