天麻钩藤饮对青光眼视网膜神经节细胞保护机理的研究

青光眼是世界上第二大致盲眼病。视网膜神经节细胞的死亡是青光眼最终致盲的原因。阿尔茨海默病（老年痴呆症）和青光眼在诱发机制上有许多共同点。根据中医基础理论和中医对老年痴呆症的辨证特点拟定的方剂天麻钩藤饮对老年痴呆症治疗的有效性安全性已得到证实。本课题拟采用经基础实验和临床工作摸索加减而成的天麻钩藤饮干预大鼠急慢性高眼压模型，借助组织病理学和分子生物学手段，观察天麻钩藤饮对视网膜神经节细胞凋亡，N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体活性，胆碱能M受体活性，兴奋性氨基酸，谷胱甘肽过氧化物酶，β淀粉样蛋白，表达黑视素视网膜神经节细胞以及视神经和上游神经中枢等的作用，深入研究天麻钩藤饮对青光眼视网膜神经节细胞的保护作用及调控机理，采集中药对视网膜神经节细胞保护作用量效关系的数据，为临床开发抗青光眼药物提供基础。

本课题通过两个动物模型（大鼠视神经夹伤模型和L-谷氨酸致神经兴奋性毒性损伤模型）研究了天麻钩藤饮对视网膜神经节(RGCs)的保护作用，发现该药有确切的节细胞保护作用，又对其作用机制进行了探讨，具体如下：.1..天麻钩藤饮对大鼠视神经夹伤模型RGCs的保护作用.①荧光金逆行标记，RGCs记数，天麻钩藤饮组与阴性对照组之间均有显著性差异（p<0.05）。.②天麻钩藤饮低剂量、中剂量、高剂量给药1个月和3个月组，观察视网膜厚度，表明给药1个月组，天麻钩藤饮中、高剂量明显增加视网膜厚度（p<0.01），给药3个月，天麻钩藤饮各剂量组均增加了大鼠视网膜厚度（p<0.05）。.③天麻钩藤饮对L-谷氨酸致大鼠RGCs损伤模型的保护作用.天麻钩藤饮低、中、高剂量给药，处死大鼠取视网膜进行铺片视网膜焦油紫染色。天麻钩藤饮各剂量组可以减少L-谷氨酸致神经兴奋性毒性损伤模型RGCs的丢失。.2．天麻钩藤饮对大鼠视神经夹伤模型RGCs保护作用机制的研究.①凋亡相关机制的研究，TUNNEL法检测RGCs的凋亡情况，经单因素方差分析，1个月组中剂量组减少RGCs的凋亡（p<0.05），高剂量组和阳性对照组均能显著减少RGCs的凋亡（p<0.01）。3个月组天麻钩藤饮各剂量组与阴性对照组比较均减少RGCs的凋亡（p<0.05）。并且各剂量组之间差异不具有统计学意义（p＞0.1）。.②免疫组化实验结果：给药1个月，中、高剂量组可以显著降低视网膜NMDA受体的结合能力（p<0.01），提高胆碱能受体M3活性（p<0.01），同时减少视网膜神经节细胞β淀粉样蛋白的沉积（p<0.01）。给药3个月，天麻钩藤饮各剂量均明显降低视网膜NMDA受体的活性；提高胆碱能受体M3的活性；明显减少β淀粉样蛋白的沉积 (p<0.05)。.③ 抗氧化实验，给药1个月，运用化学比色法测定大鼠视网膜谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性，模型组GSH-Px的活性明显降低（P0.05），而天麻钩藤饮低、高剂量治疗后对其有明显的改善作用（P0.05）。.本实验证明天麻钩藤饮对大鼠视网膜神经节细胞具有保护作用，具有临床应用前景。