疏肝通窍法对青光眼视网膜神经节细胞保护通路激活的研究

研究内容.青光眼是高致盲性眼病，由于高眼压引起视神经节细胞凋亡是导致视功能损害的主要病理机制。本课题着眼于疏肝通窍法对青光眼引起视神经萎缩的防治研究。以经验方通窍明目4号为干预手段，以大鼠慢性高眼压模型视网膜内转录信号转导和激活因子3(STAT3)通路、视神经节细胞（RGCs）、视网膜抗凋亡基因Bcl-xl为干预靶点，采用病理组织学观察、免疫组织化学、免疫印记和细胞超微结构检测等方法，从整体及细胞、基因等多个层次系统地研究疏肝通窍法对青光眼的视神经保护作用及分子学作用机制，从而为中药方剂对神经元的保护提供最直接的证据，为中药方剂在国际市场的认可和应用铺平道路。

背景和方向：青光眼是多种致病因素导致的高致盲性眼病，除控制眼压外，视神经保护的治疗尤其重要，目前尚无疗效可靠的视神经保护药物。中医药在治疗青光眼性视神经萎缩方面有着独特的优势，但在基础领域的研究比较匮乏，迫切需要基础研究做理论支撑。本研究探讨了疏肝通窍法对青光眼视神经损伤的作用机制，为中医药对神经元保护提供直接证据。.主要内容：本研究通过前房注射复方卡波姆建立SD大鼠慢性高眼压模型，通过光镜和电镜观察视网膜病理形态学，通过免疫组织化学和免疫印迹法观察视网膜内STAT3、Bcl-xl、MMP-9、AQP4的表达，从整体及细胞、基因等多个层次系统地研究疏肝通窍法青光眼视神经保护作用机制及靶点。.重要结果:本研究成功建立了前房注射复方卡波姆诱导SD大鼠慢性高眼压模型。结果表明疏肝通窍法改善了视网膜神经节细胞生存的微环境，保护未受损的细胞，延缓或阻止部分损伤的细胞继续变性；减轻了高眼压状态下RGCs的凋亡，使受损的视网膜全层得到改善；首次发现青光眼视神经损害机制与Stat3密切相关，表明自身的保护机制的短暂性和有限性，及时的视神经保护不可或缺；激活了stat3信号通道，使stat3活化为p- stat3,完成了JAK-stat3的信号通路激活过程，上调了Bcl-xl，有效地保护了高眼压下的视神经；上调了MMP-9的表达，进而发挥提高神经活性和促进神经再生的作用；视神经保护作用与药物剂量呈正比，与高眼压持续时间呈反比。.关键数据及其科学意义：.复方卡波姆溶液前房注射构建大鼠模型比较稳定，升高眼压效果好，峰值范围：30-40mmHg，能够满足青光眼研究的需要。在进行造模的研究中，找到了最佳剂量、模型的有效时间窗、测眼压麻醉的有效方法，给制定建立慢性高眼压大鼠模型的标准化操作规范提供依据。 .光镜和电镜观察超微结构，用药后各组视网膜损伤均改善，且效果1周模型组优于2周模型组，2周模型组优于3周模型组，提示青光眼除控制眼压外，还应在早期进行视神经的保护治疗，减少神经细胞的凋亡，保护未受损的神经细胞。.免疫组化及免疫印迹提示：空白组大鼠视网膜stat3、Bcl-xl、MMP-9呈不表达或低表达，高眼压模型呈现出表达轻度上升趋势，经过药物治疗后，表达则明显上升，提示疏肝通窍法激活了视神经保护通道，发挥视神经保护作用，且与药物剂量呈正比，与高眼压持续时间呈反比。