四神丸干预mTOR-DC信号调节肠道菌群平衡治疗脾肾阳虚型溃疡性结肠炎的作用机制研究

The dysfunction of the relation of gut micirobiome (GM) and dendrtic cell (DC) is played very important role in the morbidity of inflammatory bowel disease (IBD). It is a significant direct of the treatment of IBD via regulating the relation of GM and DC. However, it is one of the hotspot of the latent reaches in the activation of DC via non –coding mTOR-DC signaling pathway. Sishen Wan (SSW) effectively prevented ulcerative colitis (UC) relapsing in clinic. However, its mechanism is not clear. Those provious studies had proved that the effect of SSW effectively treted ulcerative colitis is realized by regulating costimulatroy molecules of DCs. P38MAPK pathway closely related with energy metabolism. But it is not known that SSW can regulate GM to treat experimental colitis. In the present study, we will evaluate curative effect of SSW treated UC, the level of GM and the activation of DC and mTOR signaling pathway, and analyzed the relation of the above three factors by Metagenomics, western blot assay and flow cytometry and so on. All analyses is to explore the possible mechanism of SSW treated via GM.

肠道菌群(GM)与树突状细胞(DC)识别间的功能紊乱在炎症性肠病(IBD)发病中扮演了重要角色，调控GM与DC的关系是IBD治疗的主要方向之一。而mTOR-DC信号调控DC的活化是当前的研究热点之一。有研究证明四神丸有效治疗UC可能与调节树突状细胞表面活性分子有关，但其能否通过调控肠道菌群平衡达到治疗UC的目的鲜见报道。我们拟采用经典的脾肾阳虚型UC动物模型，经四神丸治疗后，分别采用宏基因分析、流式细胞术等试验方法，验证四神丸治疗UC疗效，并全面分析UC大鼠肠道菌群变化、树突状细胞及mTOR信号活化情况及其三者之间的相关性，进而从mTOR-DC信号的角度出发，旨在探索四神丸调节肠道菌群平衡治疗UC的可能作用靶点。

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）是一种以结直肠慢性、复发性或进展性炎症为特征的疾病。免疫状态紊乱、肠道菌群失衡是 UC 发病的重要特征之一，其中树突状细胞（dendritic cells, DCs）是平衡免疫耐受和主动免疫的重要节点。四神丸无论临床还是动物实验，治疗溃疡性结肠炎均具有较好的疗效，其作用机制可能和调控树突状细胞表面共刺激分子相关。所以我们提出科学假设，四神丸可以通过干预 mTOR-DC 信号调节肠道菌群平衡治疗脾肾阳虚型溃疡性结肠炎。.本课题通过葡聚糖硫酸钠（DSS）+肌肉注射氢化可的松+大黄灌胃法建立脾肾阳虚型结肠炎小鼠模型，发现四神丸可以明显改善溃疡性结肠炎小鼠状态，修复小鼠结肠黏膜；可通过降低脾脏组织中CD103+CD11c+CD324+、CD103+CD11c+TNF-α+、CD103+CD11c+ INOS+表达水平以重塑肠道促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-12 和抑炎因子 IL-10、IFN-γ的平衡治疗溃疡性结肠炎。还能显著降低m-TOR信号通路上PI3K、Smad2、TRAF6、mTOR、p-mTOR、Raptor、Rictor蛋白和NF-κB信号通路上TLR4、NF-κB、TRAF6、Myd88、TAB2 蛋白表达水平，显著升高PTEN、IκB蛋白表达水平。降低小鼠脾脏树突状细胞表面共刺激分子CD40，CD24，CD135，CD107b，CD115，CCR6的表达水平，升高CD172a，F4/80水平，说明四神丸可能通过调节树突状细胞表面共刺激信号的能力，抑制树突状细胞抗原提呈功能和成熟，抑制促炎因子的分泌，进而抑制炎性细胞浸润缓解炎症反应损伤。.四神丸能增加肠道菌群丰度及多样性，升高毛螺菌科、候选单胞生糖菌属等数量，降低腔隙杆菌、乳酸杆菌等数量，丰度接近正常组。但是四神丸对脾肾阳虚型结肠炎小鼠肠道菌群整体影响不明显，可能神丸治疗脾肾阳虚型结肠炎小鼠不是通过改善小鼠肠道菌群实现的。.以上结果提示四神丸治疗溃疡性结肠炎作用可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号的活化、干预TLR4/NF-κB信号通路，降低炎性因子的表达，从而调控炎性 DC 的表达，改善结肠黏膜组织受损情况，最终达到治疗脾肾阳虚型 UC 的目的。