STAT3相关miRNAs介导肿瘤免疫逃逸及其调控机制

越来越多的研究证明miRNA不仅直接促进肿瘤细胞的发生发展，而且也可能参与肿瘤的免疫逃逸。本组前期研究亦表明核转录因子STAT3具备促进肿瘤发生发展并介导免疫逃逸的特性，本研究将利用本组建立的靶向阻断STAT3信号通路的肿瘤模型，发现STAT3相关miRNA群谱及其肿瘤免疫逃逸机制。利用qPCR和芯片等技术发现与STAT3信号通路及其肿瘤发生发展密切相关的miRNA群谱；通过体内外模型观察过表达/沉默候选miRNA后肿瘤细胞表达负性细胞因子谱和负性共刺激因子的变化及其对肿瘤周边免疫细胞功能的影响，发现miRNA在STAT3行使免疫逃逸功能过程中所发挥的作用；通过luciferase 报告系统鉴定侯选miRNA所调控的靶基因，确定STAT3调控候选miRNA的作用方式。在miRNA水平阐明STAT3过度活化导致肿瘤免疫逃逸的机制，并为肿瘤免疫基因治疗提供新的理论依据和潜在治疗靶点。

STAT3是信号转导与转录活化因子家族的重要成员，在胞浆中传递信息,在胞核中发挥转录激活作用。STAT3蛋白参与了多种细胞因子的信号转导过程，对细胞的生长和存活发挥重要的调控作用。目前已发现的STAT3靶基因包括抗凋亡基因bcl-xl、mcl-1和细胞周期控制基因cyclin D1、cyclin E、c-myc和p21等，这些靶基因与细胞增殖、分化、生存、恶性转化及凋亡抑制等活动的调控密切相关。另外，STAT3异常活化导致的抗炎因子（IL-10、VEGF、TGF-β）过高是DC和CTL活化分化受阻的关键原因。因此，STAT3已被认为是一种癌基因，是肿瘤治疗的新靶点。microRNA（miRNA）是一类主要在转录后水平上对基因表达进行调节的短片段非编码RNA，是近年来生命科学研究领域的一个焦点。研究发现，与正常组织相比，人类肿瘤组织中miRNA的表达水平以及类型均发生显著改变；此外，许多miRNA改变在肿瘤形成之前即已出现，而非仅仅是发生于肿瘤形成之后的一种继发性改变。在肝脏中，miRNA成分异常或功能失调与肝细胞增殖分化以及原发性肝癌的发生等密切相关。因此，miRNA作为一种新的肿瘤诊断和治疗的靶点，为人类战胜恶性肿瘤开辟了新的思路。本课题组在前期的研究中正明，肝癌细胞中过度活化的STAT3是导致肿瘤免疫逃逸的关键因子之一，那么STAT3是否会通过调控miRNA来介导这一过程呢？.本研究以肝癌细胞系HepG2、H7402、PLC/PRF/C为研究对象，首先证明阻断HCC中STAT3，可以通过上调NKG2D配体如ULBPs的表达和抑制免疫抑制因子如IL-10、TGF-的产生，逆转HCC对NK细胞的抑制作用，提高HCC对NK细胞杀伤的敏感性。然后，通过干预STAT3，检测肿瘤细胞中miRNA表达谱的变化，寻找与肝癌细胞中STAT3信号相关的关键miRNA分子，研究其与STAT3的相互关系及其在STAT3介导的肿瘤免疫逃逸中的作用。我们发现用decoy ODN特异性阻断STAT3后肝癌细胞中miR-146a表达降低、miR-155表达升高。STAT3能够直接结合miR-146a和miR-155的启动子而靶向调控其表达，但是STAT3对两种miRNA的调控机制不同。其中，STAT3的活化能够上调miR-146a的表达，发挥促进HCC发展的作用；但是，STAT3活化会促进