MicroRNA调控HBV感染肝细胞的固有免疫应答及其分子机制

宿主miRNAs可以调节固有免疫相关基因表达，也可以直接干扰病毒复制。病毒miRNAs则可以通过改变宿主miRNAs表达谱而直接或间接干扰宿主天然免疫应答。已知HBV感染可引起肝细胞miRNAs谱变化，但HBV诱发的miRNAs群谱变化与HBV的免疫逃逸的关系尚不清楚。我们在利用本室在HBV感染的细胞模型、HBV转基因鼠、HBV全基因肝脏高压注射鼠模型和病人肝脏标本所发现的、与HBV天然免疫应答有关的宿主miRNAs的基础上，进一步对miRNAs谱进行更广泛的实时动态追踪。同时采用miRNAs剔除/沉默或高表达技术，在细胞模型和小鼠模型中验证候选miRNAs对HBV复制和抗病毒天然免疫基因（天然免疫受体和天然免疫细胞因子及其信号通路）的调控作用，在miRNAs层次进一步阐述HBV免疫应答和耐受机理，为HBV感染的治疗提供新靶点。

乙型肝炎病毒的感染（CHB）是严重威胁国人健康的重大传染病。HBV病毒可以在分子、细胞、器官和个体多个层次上对机体抗病毒免疫产生抑制和耐受，造成HBV感染容易慢性化。肝脏免疫学认为，机体抗病毒免疫反应的激活是抑制、清除HBV以及药物治疗取得理想疗效的必要因素。然而，目前以针对HBV负向免疫调节作用的研究相对滞后，限制了抗HBV免疫治疗药物的开发。.miRNA是近年来发现的一类主要在转录后水平上对基因表达进行调节的非编码小RNA。在抗病毒天然免疫反应中，miRNA既可以成为典型的基因调控因子，也能够成为直接靶向转录物而发挥干扰作用的免疫效应分子。同时，在HBV的致病过程中，宿主miRNA同样参与了病毒复制、转录、包装等生命活动，通过调控宿主基因参与了炎症反应、免疫损伤、促进自身潜伏、诱发继发性疾病乃至肝癌，成为研究HBV与宿主相互作用的重要窗口。.研究目的：寻找可能参与HBV诱导胞内天然免疫抑制，特别是“干扰素抵抗”的miRNA。通过干预miRNA的表达水平，分析相关miRNA与HBV感染之间的关系，并研究其在HBV造成的肝细胞胞内抗病毒免疫应答信号的调节，探究其与“干扰素抵抗”是否相关。利用生物信息学和分子生物学的手段鉴定在这一过程中miRNA发挥作用的关键靶分子，并寻找HBV感染与相关分子之间动态水平的关联。最后，利用HBV复制性小鼠模型，研究靶向干预特定miRNA能否改变HBV的体内感染过程，为开发基于miRNA的新型抗HBV免疫药物提供理论和实验依据。.研究结论：1. HBV阳性肝癌细胞系HepG2.2.15中miR146a的表达水平显著高于HepG2细胞。2. miR146a的存在促进了HBV的生命活动和自身存续。3. miR146a通过对靶基因STAT1翻译的抑制，负调了肝细胞对I型干扰素诱导的抗病毒反应的应答能力，而抑制miR146a的功能则可以提高I型干扰素体内外抗病毒效果。4. 人IFIT3是miR146a的直接的靶基因之一，且可能具有直接的抗HBV作用。5. miR146a通过对靶基因IFIT3和TRAF6翻译的抑制，负调5’ppp-RNA对肝细胞内源性I型干扰素的诱导，而抑制miR146a的功能可以增强5’ppp-RNA的刺激作用，促进I型干扰素的转录和表达。