HLA II限制性HBsAg T细胞表位突变介导免疫逃逸影响病毒清除机理研究

The immune selective pressure of HLA molecules plays an important role in viral immune escape. Studies have confirmed the impact of single nucleotide polymorphisms (SNPs) of HLA-I and II molecules on the outcome of chronic hepatitis B. Recent study revealed an association between HLA-DQ SNPs rs7453920 and HBsAg levels. However the mechanisms associated is not clear. Our previous study showed that HBsAg variability is associated with the response of PEG-IFN plus TDF and HBsAg loss. Based on the finding of our previous study, we speculate that the occurence of selective mutation within the HLA-II restricted HBsAg T cell epitopes, under the selective pressur of host immune and antiviral therapy, could affect T cell response. Here we intend to identify the HLA-II restriced HBsAg T-Cell escape mutations occurs before, during and after the end of therapy combining HBV special T cell response, in order to determine the effect of HLA-II restricted HBsAg escape mutation on viral clearance、HBsAg seroconversion and its intrinsic mechanism. Moreover, we aim to verify the hypothesis mechanism via CHB mice model to improve the virus clearance and HBsAg loss rate.

宿主HLA类分子的免疫选择压力在病毒免疫逃逸中具有重要作用。已有研究证实HLA类分子的单核苷酸多态性影响慢乙肝的转归。近期研究发现HLA-DQ区域的rs7453920与HBsAg滴度相关联。但是HLA-II类分子如何影响HBV感染结局并不清除。申请者前期研究发现HBsAg变异影响抗病毒治疗疗效及HBsAg血清学转换。我们推测在宿主免疫及抗病毒治疗双重压力下，HBsAg上HLA-II类分子限制性T细胞抗原表位可能发生变异，从而介导T细胞免疫逃逸影响病毒感染结局。本课题拟用超深焦磷酸测序方法检测慢乙肝患者抗病毒治疗前、中、后HBsAg上T细胞表位突变的动态变化，并分析HBV特异性T细胞应答变化，探讨HLA-II类分子限制性HBsAg逃逸突变对病毒清除、HBsAg血清学转换的影响及内在机制，并通过建立慢性HBV感染小鼠模型进一步验证上述机制，为提高病毒清除、HBsAg血清学转换率提供实验依据。

宿主HLA类分子的免疫选择压力在病毒免疫逃逸中具有重要作用。干扰素(IFN)联合核苷类似物(NAs)治疗明显提高患者HBsAg阴转率，但其作用机制并不清楚。申请者前期研究发现HBsAg变异影响IFN+TDF抗病毒治疗疗效及HBsAg血清学转换。本实验对三种抗病毒治疗方案（IFN, NAs和IFN+NAs）的治疗疗效，影响疗效的HLA限制的HBsAg T细胞表位突变，HLA单核苷酸多态性及其对应动态免疫状态改变进行了研究。我们发现IFN+NAs治疗比单用IFN或NAs治疗患者的血清 HBsAg 水平下降更明显。在IFN+NAs治疗组中，HLA限制的HBsAg T细胞表位区存在较低的突变频率，其与血清 HBsAg 下降水平呈负相关, 并且随着治疗时间延长逐渐降低。证实HLA限制T细胞表位变异对T细胞免疫应答的影响，从而影响HBsAg阴转。同时本研究发现携带HLA DPB1（rs9277535）非等位基因的患者血清HBsAg下降缓慢，进一步证实治疗前患者体内HBV准种复杂度尤其是HLA限制的S区T细胞表位突变情况预测HBsAg下降快慢及清除。其紧接的IFN+NAs治疗方案的动态免疫压力与药物选择的病毒适应关系的研究，可对慢乙肝抗病毒治疗方案的优化提供更好的理论基础。