Amotl2对胎盘发育调控及与子痫前期发病关系的研究

Mammalian placentation is a highly regulated process and is dependent on the proper differentiation of specific trophoblast cell lineages. Inadequate trophoblast differentiation results in poor placenta perfusion, which mediate maternal injury leading to diseases such as early pregnancy loss; preeclampsia. Trophoblast cell proper invasion and tumor cell uncontrolled invasion are two different manifestations with the same cell behaviors and results.. Angiomotin-like2 gene(amotl2) as an important factor of novel formation of blood vessels (angiogenesis)，is required for cell movement and promoted tumor invation. However, the role of Amotl2 in trophoblast function during placental development and whether its dysregulation associated with preeclampsia have not been examined. In vitro, we use matrigel invastion, transwell migration and mice trophblast stem cell models to study the role of Amotl2 in trophoblast invasion and the molecular mechanisms. In vivo, we use CRISPR/Cas9 system to generated Amotl2 knockout mice and combined lentivirus-mediated placenta-specific knockdown/overexpression mice models to study the role of Amotl2 in placenta development and the relationship with preeclampsia. Our research may further clarify the molecular mechanism of human placental development, and the results may contribute to the pathogenesis of clinical development disorder.

哺乳动物胎盘滋养层细胞的分化是成功妊娠的关键环节。滋养层细胞侵袭母体蜕膜异常将引起流产、子痫前期等产科相关疾病。滋养层细胞侵入的精确调控与肿瘤细胞侵袭的无序失控是细胞相同行为在机体的两种不同表现方式和结果。Amotl2作为调节血管形成的重要因子，具有调控细胞运动促进肿瘤的侵袭的作用，然而Amotl2对滋养层细胞分化的影响及其异常表达与妊娠疾病（如子痫前期）的关系尚无报道。本研究以探讨Amotl2在胎盘发育中的作用及其分子机制为出发点，离体条件下，通过人滋养层细胞侵袭和迁移模型、小鼠滋养层干细胞分化模型、过表达和干扰等方法研究Amotl2对滋养层细胞分化的影响和机制。在体条件下，利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除小鼠模型，结合慢病毒介导的胎盘特异性敲低/过表达小鼠模型，进行胎盘表型分析，研究Amotl2对胎盘发育的影响，为胎盘发育障碍的的临床治疗提供重要的理论支撑。

哺乳动物胎盘发生是成功妊娠的关键环节，滋养层细胞的分化包括两个分化方式：形成具有高侵润能力的绒毛外滋养层细胞；融合形成合体滋养层细胞。胎盘滋养层细胞分化和侵润母体蜕膜异常将引起流产、子痫前期或胎儿生长受限等疾病，严重威胁妇儿健康。在胎盘发育的一个重要分化过程是滋养层细胞向母体的侵润。滋养层细胞侵入的精确调控与肿瘤细胞侵袭的无序失控是细胞相同行为在机体的两种不同表现方式和结果。Amotl2作为调节血管形成的重要因子，具有调控细胞运动促进肿瘤的侵袭的作用，然而Amotl2对滋养层细胞分化的影响及其异常表达与妊娠疾病（如子痫前期）的关系尚无报道。 .本研究以探讨Amotl2在胎盘发育中的作用及其分子机制为出发点，离体条件下，通过人滋养层细胞侵袭和迁移模型、过表达和干扰等方法研究Amotl2对滋养层细胞分化的影响和机制。在体条件下，利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除小鼠模型，结合慢病毒介导的胎盘特异性敲低/过表达小鼠模型，进行胎盘表型分析，研究Amotl2对胎盘发育的影响。.我们实验室的研究成果发现Amotl2高表达于具有侵润能力的人类早期绒毛中的细胞滋养层和绒毛外滋养层中以及来源于早期绒毛滋养层细胞的HTR8/SVneo 和B6-tert细胞系。Tanswell小室的metrigel实验和迁移实验表明，在HTR8/SVneo 细胞系siRNA干扰Amotl2的表达后，可以显著抑制细胞的侵润和迁移。对侵润和迁移的抑制是通过抑制MMP9的表达，增加TIMP1,-2的表达来实现的。同时，我们实验还发现Amotl2在人类的子痫前期胎盘中表达明显降低。小鼠在体研究方面，我们利用CRISPR/Cas9技术成功构建基因敲除小鼠，没有发现小鼠的生殖能力有显著性影响。利用慢病毒介导的胎盘特异性敲低小鼠模型正在进一步分析中。综上所述，我们初步得出一个结论，Amotl2促进人滋养层细胞的侵润和迁移，并且它的表达和妊娠疾病子痫前期有关系。