GS-9620基于HRS/TLR7复合物介导NF-κB信号通路发挥抗EV71 的作用机制研究

Enterovirus 71 is the main pathogen causing severe hand, foot and mouth disease, and there is currently no effective treatment. Recent studies have shown that after EV71-infected cells, toll-like receptors 7 (TLR7) forms a complex with hepatocyte growth factor-regulated tyrosine kinase substrate (HRS), which acts as a signaling molecule that activates the NF-κB signaling pathway and triggers cytokine storms. The applicants found that the TLR7 agonist GS-9620 can enhance the survival rate of EV71-infected mice by attenuating the NF-κB signaling pathway and inhibiting the HRS/TLR7 complex at the cellular level. form. Based on this, Applicants believe that GS-9620 may attenuate NF-κB signaling pathway by inhibiting the formation of HRS/TLR7 complex and exert anti-EV71 infection. To validate this hypothesis, it is proposed to analyze the effects of GS-9620 on HRS/TLR7 complex formation and NF-κB signaling pathway activity and the HRS/TLR7 complex pair at the animal level by means of co-immunoprecipitation and mouse model construction. Regulation of the NF-κB signaling pathway. The results will provide a theoretical basis for the clinical application of GS-9620 and will provide a new perspective for a new generation of highly effective anti-EV71 drugs.

EV71是引起重症手足口病的主要病原体，目前其尚无有效治疗药物。最新研究表明，在EV71感染细胞后，TLR7与HRS形成复合物，该复合物作为信号分子，能激活NF-κB信号通路，引发细胞因子风暴。而申请人前期发现TLR7激动剂GS-9620可通过减弱NF-κB信号通路发挥抗EV71作用，提高了EV71感染小鼠的生存率；并在细胞水平上发现GS-9620能抑制HRS/TLR7复合物形成。基于此，申请人认为GS-9620可能通过抑制HRS/TLR7复合物的形成，减弱NF-κB信号通路，发挥抗EV71感染的作用。为验证该假说，拟利用免疫共沉淀、构建小鼠模型等方法，在动物水平上分析GS-9620对HRS/TLR7复合物形成和NF-κB信号通路活性的影响，以及HRS/TLR7复合物对NF-κB信号通路的调控作用。研究结果将为GS-9620的临床应用提供理论基础，将为新一代高效抗EV71药物提供新视角。

银屑病是一种复发性自身免疫性皮肤病，其特征是角质细胞（keratinocyte，KC）过度增殖、异常分化和炎症增加。影响全球1-3%的人口，世界卫生组织（WHO）2016年报告显示中国银屑病的患病率从1984年的0.17%上升至2009年的0.59%，提示我国银屑病患病率有明显升高趋势。KCs和T17细胞之间的串扰产生了负责诱导和维持银屑病的免疫回路。因此，银屑病KCs在银屑病的炎症致病循环中发挥核心作用，不仅作为免疫反应的触发器，也是促炎效应物。.自噬是细胞分解其成分维持体内平衡的一个重要过程。某些自噬位点与炎症性疾病的遗传易感性之间存在联系，自噬已被报道为多种自身免疫性疾病的潜在治疗靶点。在银屑病小鼠模型中，骨髓源性细胞(BMDC)自噬诱导MYD88 (MYD88固有免疫信号转导受体)的降解，并在咪喹莫特(IMQ)刺激下控制MYD88依赖性细胞因子的激活。这些结果表明，自噬可能在银屑病中发挥关键作用。.我们构建咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型，设定正常组，IMQ组，IMQ+GS-9620组，干预天，观察各组小鼠皮损状态，PASI分，表皮厚度，机体炎症。研究结果显示，IMQ+GS-9620组发现小鼠皮损得到了很大的改善，其PASI评分得到了明显降低。取皮损组织，利用H&E染色，IMQ组小鼠表皮变厚，IMQ+GS-9620组较IMQ组明显变薄。间接证明表皮炎症得到改善；对比脾脏和淋巴结组织体积，IMQ组明显变大，IMQ+GS-9620组较IMQ组变小，间接证明其机体的炎症得到改善。对脾脏和淋巴结细胞进行流式细胞仪检测相关炎性因子和细胞，IMQ+GS-9620组较IMQ组，炎性细胞和炎性因子表达明显降低。对比健康人和银屑病患者表皮中自噬相关蛋白的表达，发现银屑病患者表皮中ATG5、ATG7、ATG16和Beclin-1表达低于正常人。小鼠实验，正常组，IMQ组和GS-9620组三组小鼠表皮中，IMQ组这种蛋白表达低于正常人，GS-9620组小鼠的蛋白表达相较于IMQ组，明显增加。我们推测GS-9620通过增加小鼠表皮细胞的自噬，发挥抗炎作用。