乙肝病毒核心蛋白HLA限制性T细胞表位新型突变促进HBeAg血清学转换的相关机制研究

Spontaneous HBeAg seroconversion can occur in some patients with HBeAg-positive CHB, but the exact mechanism is unknown. For the first time, we found that the PreC/C-126, 184-point mutations of HBV genome were significantly associated with spontaneous HBeAg seroconversion and accompanied by a decrease in serum viral load. Further analysis showed that the PreC/C-126 and 184 were located in the HBc HLA-restricted Tc and Th epitopes, respectively, and the PreC/C-184 mutation could affect the physicochemical properties of the corresponding epitope. Therefore, we hypothesized that HBV PreC/C-126, 184 mutations promote HBeAg seroconversion by affecting the specific humoral and cytotoxic antiviral effects mediated by HBc HLA-restricted T cell epitopes. In this study, we aim to investigate the specific humoral and cellular immune responses of PreC/C-126 and 184-point mutations involved in HBeAg seroconversion through the researches on HBV transfected cells, mouse models and CHB cohort. In this way, we attempt to clarify the relevant mechanisms of spontaneous HBeAg seroconversion.

部分HBeAg阳性CHB患者可以出现自发性HBeAg血清学转换，但具体机制不明。我们首次发现HBV PreC/C126、184位点突变与自发性HBeAg血清学转换显著相关，同时伴随血清病毒载量明显下降。进一步分析显示PreC/C126、184分别位于HBc HLA限制性Tc表位和Th表位，且PreC/C184突变会影响相应表位的特异性结合。因此我们推测HBV PreC/C126、184位点突变是通过影响HBc HLA限制性T细胞表位介导的体液免疫应答和细胞毒性抗病毒效应，从而促进了HBeAg血清学转换。本项目拟在此基础上，从HBV转染细胞、小鼠模型以及CHB队列入手，探讨PreC/C126、184位点突变驱动HBeAg血清学转换的特异性体液免疫及细胞免疫应答水平，试图阐明自发性HBeAg血清学转换的机制。项目的实施将丰富我们对自发性HBeAg血清学转换和CHB疾病自然转归的认识和理解。

HBeAg血清学转换是慢性乙型肝炎（CHB）病程中一个重要的里程碑。临床观察发现部分HBeAg阳性CHB患者可以出现自发性HBeAg血清学转换，但具体机制不明。我们首次发现了HBV PreC/C126、184位点突变与自发性HBeAg血清学转换显著相关，并在另一项回顾性队列研究中，利用多元回归模型校正了年龄、性别、病毒基因型、血清ALT水平、HBV DNA定量和PreC W28*等相关混杂因素后，进一步证实了HBV ORF-PreC/C PreC/C126和PreC/C184位点的突变与HBeAg血清学转换的关系。我们利用构建的携带HBV PreC/C基因PreC/C126突变型、PreC/C184突变型的pcDNA3.1 myc-His C质粒，转染HepG2细胞，发现上清中HBeAg表达量以及胞内mRNA的水平均降低，在细胞水平验证了HBV PreC/C126、PreC/C184位点突变会降低HBeAg的表达。利用pAAV-HBV1.2质粒，运用高压水动力尾静脉注射法建立慢性HBV转染小鼠模型，通过流式细胞术检测了慢性HBV转染小鼠模型和CHB队列患者的外周血中目的细胞的频数、表型和功能，描绘了CXCR5+CD8+ T细胞以及相关表面分子的变化规律，发现CXCR5+CD8+T 细胞频数在HBeAg 阴性、低病毒载量、低HBsAg定量的状态下表达较高。采用细胞因子芯片技术高通量筛选发现携带HBV PreC/C基因PreC/C126突变、PreC/C184的突变病毒株在发生HBeAg血清学转换过程中，IL-10浓度有所增加。最终阐明了CXCR5+CD8+ T细胞、IL-10在HBV PreC/C基因PreC/C126突变、PreC/C184突变所诱导的HBeAg清除/转换中的作用。