泛素连接酶CHIP调控胶质瘤增殖侵袭及化疗耐药的机制研究

E3泛素连接酶CHIP是在转录后水平调控蛋白表达的重要分子，可调控p53、HIF-1等多种肿瘤相关蛋白和Akt等信号通路，但在肿瘤中研究甚少。课题组前期首次在细胞和动物水平证明CHIP能够促进胶质瘤增殖和克隆形成，是潜在的分子治疗靶标，癌基因survivin是其重要的下游调控分子，但其具体调控机制有待于进一步研究。本项目拟在前期基础上，进一步探讨CHIP在胶质瘤侵袭、新生血管形成、化疗耐药中的作用，并利用非整合型慢病毒RNA干扰、蛋白芯片、组织芯片、免疫共沉淀、蛋白酶体活性抑制、免疫组化等技术，筛选并验证与CHIP相关的下游调控蛋白和信号通路，研究其参与调控胶质瘤恶性生物学行为的具体机制，及其表达与临床胶质瘤患者预后生存期及化疗疗效的相关性。为临床预测胶质瘤患者预后及化疗敏感性、术后治疗方案的个体化选择和分子靶向化疗提供了实验依据，具有显著的临床意义。

脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤，其侵袭性增殖复发是致死的主要原因。因此，探寻胶质瘤恶性增殖的机制具有十分重要的意义。课题组通过研究发现，泛素连接酶CHIP在肿瘤中表达异常增高，体内外研究表明其与细胞恶性增殖等密切相关，但其具体调控机制不明。立项后，首先进一步明确了CHIP蛋白促进胶质瘤迁移、侵袭等恶性生物学行为的现象，并构建了高通量miRNA和mRNA芯片，筛选CHIP表达改变后下游的差异表达基因和miRNA。结果提示：CHIP表达改变后共筛选出差异表达基因398条，其中上调93条，下调305条；差异表达的miRNA有103条，生物信息学分析后发现miR92b随CHIP表达下调而下降26倍，利用Q-RT-PCR验证了生物信息学分析的结果。为进一步寻找下游调控分子，通过TargetScan和 microRNAorg软件预测其靶基因，显示PTEN为miR92b的靶基因，在胶质母细胞瘤细胞系中进行的双荧光素报告实验和Western Blot进一步证实了该结果。进一步通过肿瘤信号蛋白芯片筛选，提示下游信号通路PI3K/Akt/FOXO异常活化，而PTEN正是调节该通路的最重要调控因子。同时，对下游FOXO1分子的组织芯片研究提示其表达量升高与胶质母细胞瘤患者不良预后明确相关。据此，课题组做出了如下推论：CHIP通过microRNA-92b抑制靶基因PTEN表达，激活PI3K/Akt/FOXO通路，从而促进胶质瘤的恶性增殖，进一步的机制探索已获得国家自然基金面上项目支持，正在进行中。项目共发表SCI收录论文4篇，大会发言3次，获得专利1项。