肝星状细胞靶向环肽修饰的干扰素－γ脂质体治疗肝纤维化的研究

肝星状细胞（HSC）是肝纤维化治疗的靶细胞。干扰素－γ（IFN-γ）在动物体内外研究中发现具有一定的抗肝纤维化作用，但是具体的作用机制尚不清楚，并且临床运用IFN-γ治疗肝硬化患者未收获预期的治疗效果。因此，本课题在前期成功制备能特异识别HSC表面的Ⅵ胶原受体的RGD环肽修饰的脂质体基础上，拟合成RGD环肽修饰的包封IFN-γ的脂质体（该环肽与HSC结合后将被内吞进入胞浆内起作用）；并合成能特异识别HSC表面的血小板来源生长因子受体的pPB环肽，进一步合成pPB环肽修饰的包封IFN-γ的脂质体（该环肽与HSC结合后将滞留于细胞表面起作用），利用脂质体的包封延长IFN-γ的作用时间并通过靶向环肽的修饰增强IFN-γ对HSC的作用，从而增强IFN-γ的抗纤维化作用并减弱其的毒副作用；同时通过比较二者的作用效果来进一步探讨IFN-γ的抗肝纤维化作用机制。

本课题基本按照研究计划进行。首先，本课题重点探讨了能特异识别肝星状细胞（HSC）表面的血小板来源生长因子受体（PDGFR）的pPB环肽所修饰的立体稳定脂质体（SSL）包封的干扰素-γ（IFN-γ）的抗肝纤维化作用。在研究中，合成了pPB环肽，并进一步合成pPB环肽修饰的立体稳定脂质体（pPB-SSL）。在体外实验中，利用培养的静止和活化的HSC证实pPB-SSL特异结合于活化的HSC，并且这种结合随着培养时间的延长和培养浓度的增加而逐渐增加，活化的HSC摄取pPB-SSL后主要向胞内转运。在体内实验中，双免疫荧光检测发现在纤维化的肝组织中，pPB-SSL主要被活化的HSC摄取。利用pPB-SSL包封干扰素-γ（IFN-γ），组织分布研究和药代动力学研究证实pPB-SSL的包封延长了IFN-γ的半衰期并增强其靶向于肝脏的作用；在硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠中，证实pPB-SSL-IFN-γ的抗纤维化作用明显优于相同剂量的游离IFN-γ、5倍剂量的游离IFN-γ和相同IFN-γ剂量的无靶向作用的SSL-IFN-γ。此外，pPB的修饰降低了SSL对肝细胞的损伤，同时pPB-SSL的包封降低了IFN-γ对白细胞的抑制作用。相关研究结果已发表于Journal of Controlled Release （2012;159:261-270；SCI影响因子6.499），指导博士研究生一名，已毕业。.此外，本课题按照研究计划还在既往研究的基础上，合成能特异识别HSC表面的Ⅵ胶原受体的RGD环肽修饰的包封IFN-γ的脂质体（RGD-SSL-IFN-γ）。在硫代乙酰胺诱导的肝纤维化大鼠中，与游离IFN-γ相比，RGD-SSL-IFN-γ同样表现出更强的抗肝纤维化作用。.由于pPB环肽修饰的IFN-γ的脂质体和RGD环肽修饰的IFN-γ的脂质体（既往研究的结果)在被活化的HSC结合后，都被摄取进入细胞内。这样，包封的IFN-γ都是在HSC细胞内起作用。所以本课题未能从不同的作用位点进行IFN-γ抗肝纤维化机制的进一步探讨。