一个功能未知的lncRNA：RASAL2-AS1促进卵巢癌侵袭转移的分子机制研究

RASAL2-AS1, an unclear function lncRNA, was overexpressed in epithelial ovarian cancer (EOC), identified using differential lncRNA Expression Array. Previous studies by our group showed that invasion and metastasis were significantly inhibited in EOC stable strains with silenced RASAL2-AS1. We predicted RASAL2 as a candidate target gene of RASAL2-AS1 based on bioinformatic analysis and previous experiment data and we hypothesized that RASAL2-AS1 may recruit SETDB1 and subsequently decreasing the expression of RASAL2. In this study we will further uncover the biological characteristics of RASAL2-AS1. Adopting overexpression and knockdown strategies, we intend to explict the role of RASAL2-AS1 in invasion and metastasis of EOC. Highlighted by the relationship between RASAL2 and RASAL2-AS1, we design to investigate the interaction between RASAL2 and RASAL2-AS1 via RIP、RNA pull-down、luciferase assay and ChIP. There was few information about the role of RASAL2-AS1. This study will provide a new target for the gene targeted therapeutics of EOC.

RASAL2-AS1是我们应用芯片技术筛选发现的、显著高表达于卵巢上皮癌、功能未知的一条lncRNA。前期发现，沉默RASAL2-AS1可显著降低卵巢上皮癌细胞的侵袭转移能力；生物信息学分析与实验发现RASAL2可能为RASAL2-AS1的调控靶标；进一步实验发现RASAL2-AS1可能通过招募组蛋白H3K9甲基化转移酶SETDB1抑制RASAL2转录，进而促进卵巢癌侵袭转移。本研究拟采用过表达和沉默策略，明确RASAL2-AS1对卵巢上皮癌侵袭转移行为的影响；通过RIP、RNA pull-down、荧光素酶报告基因、ChIP等技术，充分论证RASAL2-AS1招募SETDB1结合于RASAL2启动子表观调控RASAL2表达的分子机制。由于RASAL2-AS1功能未见报道，本研究将有助于揭示RASAL2-AS1的分子功能及其调控卵巢上皮癌侵袭转移的机制，为卵巢癌的防治提供新的干预靶标。

RASAL2-AS1是利用芯片技术筛选发现的，显著高表达于卵巢上皮癌组织、功能未知的一条长链非编码RNA（lncRNA）。我们对本院接受抗癌治疗的16例卵巢癌患者的临床资料、组织切片进行分析。并筛选出SKOV3、A2780两种RASAL2-AS1高水平表达的卵巢癌细胞株。通过采用过表达和沉默策略，分别在SKOV3、A2780两种细胞株中，分析比较过表达及沉默RASAL2-AS1前后细胞增殖、侵袭和迁移的能力。结果显示，与非癌性卵巢组织（癌旁组织）比较，卵巢癌组织中RASAL2-AS1表达量显著升高。细胞实验则证实，RASAL2-AS1显著促进细胞增殖、侵袭和迁移的能力。接下来选择lncRNA-蛋白相互作用平台进行RASAL2-AS1的互作蛋白预测并结合细胞实验，结果显示，RASAL2是候选的靶标。我们继续借助ChIPBase数据库筛选出RASAL2启动子区可结合的蛋白：组蛋白H3K9甲基化转移酶（SETDB1）。通过RIP实验我们发现RASAL2-AS1可以结合SETDB1。而进一步通过SETDB1的ChIP实验获得与之相互作用的DNA片段，通过PCR验证该段DNA序列确实为RASAL2的启动子序列。我们初步证实，RASAL2-AS1在卵巢癌中通过调控SETDB1、进而抑制靶标RASAL2的表达，促进卵巢癌细胞的增殖及侵袭迁移行为。本研究阐明的RASAL2-AS1生物学属性、功能，及其通过SETDB1调控RASAL2在卵巢癌发病中的作用和机制，将为理解卵巢癌的病因病理过程提供新的线索。