K8在KSHV流产性裂解复制中的作用及流产性裂解复制机制的研究

Abortive lytic replication, an early event of post-infection of KSHV ,which might be the third type of replication apart from lytic and latent replication, is critical for viral spread and latency establishment. However, its mechanism still unclear. K8 is a multi-functional protein that plays an important role in gene transcription and viral DNA replication ,our previous studies showed that K8 deletion impaired abortive lytic replication, which provided a window for insights into this extremely important event. Thus, we will continue to extend our knowledge on K8 and abortive lytic replication by conducting following studies: 1.Reveal the role of K8 in abortive lytic replication by screening its functions including relieving repression of LANA, recruitment of proteins , transcription and epigenetic regulation. 2. Determine the origin and mode of abortive lytic replication then create a basic model of it;3. Explore the role of K8 in the process from abortive lytic replication to latency establishment. The mechanism of this novo replication of KSHV will help us explain how virus maintains and transmits among human beings. Research on abortive lytic replication also provides theoretical guideline for preventive strategy and targeting therapy.

流产性裂解复制是卡波西氏肉瘤相关病毒（KSHV）感染细胞早期发生的病毒DNA复制，是病毒传播和潜伏期建立的最关键过程。研究表明，流产性裂解复制有可能不同于疱疹病毒中裂解复制和潜伏复制的新型复制，但其机制至今仍是未解之谜。K8是KSHV中重要的多功能蛋白，参与病毒基因的转录调控并与病毒的复制密切相关,我们前期研究发现它在流产性裂解复制中也发挥重要作用，这为研究流产性裂解复制提供了一个突破口。因此,本项目拟开展以下研究：1.从K8与LANA的平衡关系、募集蛋白、转录调控、表观遗传学调控等方面阐明K8在KSHV流产性裂解复制中的作用； 2.探明KSHV流产性裂解复制的复制起点和复制方式，构建流产性复制模型；3.揭示K8在流产性裂解复制到病毒潜伏期建立过程中的作用机制。上述研究将有助于深入理解病毒感染及在细胞中维持与传播的过程和机制，并可为寻找新的预防感染KSHV策略和治疗靶点提供依据。

卡波氏肉瘤相关的疱疹病毒（KSHV），也称为第八型人类疱疹病毒，是1994年发现并鉴定的一种人类肿瘤相关病毒。研究表明，KSHV是引起卡波氏肉瘤、原发渗出性淋巴瘤和多中心型Castleman病等与艾滋病相关的肿瘤的病原体。KSHV引起的疾病是艾滋病患者的重要致死原因。随着我国目前HIV的逐渐蔓延，KSHV感染的人数有上升的趋势，探索KSHV的致病机制并抑制其传播已变得十分必要和迫切。KSHV属于γ疱疹病毒，含潜伏感染期和裂解复制期两个感染周期。在潜伏感染期时，病毒基因组DNA会随着细胞的分裂而部分丢失。病毒为了维持在宿主的长期感染，一小部分感染细胞中的病毒会处于裂解复制期状态（约3%），不断产生新的病毒颗粒，并感染周围的细胞以维持感染细胞数和肿瘤的生长。因此，KSHV的原发感染和裂解复制对感染细胞数的维持和肿瘤的发生和发展起着重要作用。病毒初次感染后，便进行短暂的病毒DNA复制，让病毒基因组DNA扩增到50-100拷贝，但不分泌有感染力的病毒颗粒，这种病毒复制为流产期的关键过程，但其机制至今还是未解之谜。KSHV K8是与EBV中多功能蛋白ZTA的同源蛋白，但其功能和作用机制仍然有待发现。我们前期发现病毒蛋白K8是流产性复制中所必须的。本课题以K8作为研究KSHV流产性裂解复制的突破口，深入探索了K8在其中的作用和调控机制。. 本项目研究的重要发现：（1）我们首次证明了病毒蛋白K8是新的RNA结合蛋白，与多个病毒RNA和宿主细胞RNA结合。更重要的是，其RNA结合活性对病毒的流产性裂解复制起着关键作用。这些发现进一步拓展了对K8蛋白的了解，为全面解析K8功能和作用机制开辟了全新的思路。(2)KSHV T1.4 RNA的功能至今依然不清楚。本研究首次发现其在原发感染后的流产性复制起着重要作用。本研究还发现T1.4能够结合K8蛋白和病毒复制起始位点DNA，暗示T1.4 RNA可能对病毒和宿主有着更广泛的调控功能。. 流产性裂解复制对病毒的致病和潜伏期的建立都有很重要的作用，我们的研究结果为了解流产性裂解复制的机制提供了研究的方向，也为抑制流产性复制提供了重要的靶点。