转录因子COUP-TF影响公猪膻味的生物学功能和分子机理研究

全公猪具有显著社会经济效益，但膻味严重限制了其养殖的推广和实施。膻味化学物质是雄烯酮和粪臭素。体外研究初步表明COUP-TF参与了甾体合成及粪臭素主要代谢酶CYP2E1的表达调控，可能在膻味物质合成代谢过程中扮演着重要的角色，因此成为公猪膻味性状分子遗传研究中备受关注的基因。但目前还缺乏COUP-TF基因在猪体内表达与雄烯酮和粪臭素代谢沉积相关的直接证据。为了分析COUP-TF对公猪膻味的影响，本研究拟选择高低膻味猪品系，利用qRT-PCR，HPLC等技术分析COUP-TF与膻味化合物合成代谢途径中CYP17、STAR、CYP2E1基因的表达及表型的关系；利用EMSA和细胞模型，研究COUP-TF对上述基因的表达调控，以期阐明猪COUP-TF影响公猪膻味的生物学功能，揭示该基因对膻味调控的分子机理。该研究的完成具有重要理论价值，并可为从分子水平改良公猪膻味提供理论基础和实践指导。

本课题的完成情况及取得成果如下：1.获得不同种属和不同年龄阶段猪血样和组织样本；2.建立了qRT-PCR定量分析不同组织样本的方法，获得不同猪种和不同年龄阶段猪肝脏和睾丸组织中COUP-TF基因及膻味化合物合成和代谢主要相关基因的表达水平数据；3.建立粪臭素的HPLC分析方法，建立雄烯酮的ELISA分析方法，分析获得了不同猪种和不同年龄阶段血浆、肌肉、肝脏样本膻味物质的含量；4.扩增获得猪COUP-TF、CYP2E1等基因，并构建了猪COUP-TF的真核表达载体；5.培养猪睾丸细胞，建立了基于Roche Fugene介导转染的猪睾丸细胞基因转染技术体系，并构建COUP-TF基因转基因细胞模型；6.利用转基因细胞模型分析COUP-TF基因与相关膻味基因及膻味表型的关系；7.获得COUP-TF基因在猪中的时空表达规律和CYP17、STAR、CYP2E1基因及膻味性状相关性的分析结果；8.发表SCI研究论文2篇，准备投出2篇，发表核心期刊2篇；9.获得专利1项，申请专利1项。