基质溶素介导CD4+T细胞免疫应答失衡在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用研究

前期研究已成功建立基质溶素(MMP-7)慢性暴露模型(A549/MAT),证实其顺铂敏感性较亲本对照显著下降，MMP-7诱导顺铂耐药的机制尚不明确。CD4+T细胞免疫应答失衡与肿瘤化疗疗效密切相关。MMP-7在自身免疫及感染性疾病中扮演关键角色，推测其可能通过影响宿主免疫应答而增强肿瘤细胞顺铂耐药性。预实验结果示MMP-7可提高肺癌细胞吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)表达，可能是其介导CD4+T细胞免疫应答失衡的重要机制。本课题以A549/MAT为对象，体外诱导顺铂耐药株及亲本A549细胞作为对照，解析MMP-7上调IDO表达的具体机制；观察MMP-7对肺癌荷瘤小鼠CD4+T细胞免疫应答的影响；探讨纠正MMP-7相关免疫失衡对荷瘤小鼠顺铂耐药性的逆转效应。本课题尝试从免疫调控方面探讨改善肺癌顺铂耐药的可能性，结果将为深入剖析MMP-7诱导肿瘤耐药机制提供新思路，为开发抗肿瘤新药奠定基础。

本课题组前期研究已经证实切除肿瘤局部基质溶素(MMP-7)表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)患者5年生存率及化疗疗效(基于铂类方案)密切相关，高表达MMP-7预测化疗疗效欠佳。体外研究证实rhMMP-7持续小剂量诱导可通过上调抗凋亡基因Bcl-2表达而降低人肺腺癌A549细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性。已建立稳定高表达MMP-7的顺铂耐药株A549/MAT200，用于本课题的研究。本课题密切结合临床，分别针对体外培养肺癌细胞、移植瘤小鼠模型及肺癌患者展开研究。本课题创新点在于首次发现或揭示了：1）RNA干扰(RNAi)抑制MMP-7表达能增强体外培养肺癌耐药细胞株对顺铂诱导凋亡的敏感性；联合MMP-7-siRNA能降低顺铂耐药株的抵抗性，最终提高荷瘤小鼠的化疗疗效。2）NSCLC患者全身系统性及肿瘤局部CD4+T细胞免疫应答失衡与肿瘤分期、化疗疗效及预后密切相关，诱导免疫失衡可能是MMP-7促进顺铂耐药的重要机制之一。3）肺癌患者局部肿瘤组织中MMP-7与TRAF6表达成正相关，体外研究发现MMP-7高浓度可促进TRAF6表达并激活后续信号转导通路; TRAF6预处理树突状细胞(DC)可影响幼稚CD4+T细胞的分化，表现为FOXP3+Treg所占百分比增加，Th17细胞所占百分比下降。国外最新研究也证实TRAF6是调控CD4+T细胞分化及功能的关键因子，这可能是MMP-7介导免疫应答失衡的重要机制。4）miR-194在肺癌耐药株及临床肺癌标本中呈低水平表达，且miR-194与顺铂抵抗直接相关；进一步研究证实MMP-7是miR-194的直接靶点，且miR-194可以通过下调MMP-7来增强肺癌顺铂耐药株的敏感性。本项目已全面完成预期的研究内容，并根据研究结果对内容作了适当的调整和延伸。迄今为止，在SCI收录期刊已发表研究论著全文2篇，在投稿件2篇。