动脉灌注雷帕霉素联合肝动脉化疗栓塞治疗肝移植瘤兔模型实验研究

It has been estimated that more than 50% of the world’s hepatocarcinoma cases occurred in China. Although transcatheter arterial chemoembolization (TACE) has been considered as one of the most important interventional therapies for patients with unresectable or recurrent hepatocarcinoma, the five-year survival rate in these patients after TACE is still below 10%. This may be due to the embolization effect of TACE being restricted on existing tumor blood vessels, while TACE has no effect on tumor angiogenesis. Tumor angiogenesis has been considered as the basis of recurrence and metastasis for hepatocarcinoma. Therefore, how to inhibit angiogenesis in hepatocarcinoma has become a hot and important topic in clinical research. This project will evaluate the efficacy of combination of arterial chemoembolization with rapamycin in treatment of animal model with hepatocarcinoma. Meanwhile, the does of the combination will be optimized according to the efficacy, toxicity and immune response, through comparision of different routes and doses of medicine administration. A series of techniques will be applied in this project, including imaging, histology, and cytology. To investigate the mechanisms of rapamycin in inhibiting tumor angiogenesis and tumor proliferation, in situ hybridization, Western blot, immunohistochemistry, and RT-PCR will be used to monitor the gene, mRNA and protein levels of HIF-1a、VEGF、iNOS、JNK、IKK、BCL-xL and P53. This project will be a valuable contribution to our understanding about the role of immunosuppression in the inhibition of tumor angiogenesis in unresectable or recurrent hepatocarcinoma and will provide TACE with rapamycin as a potential new therapeutic approach for improving hepatocarcinoma treatment.

我国肝癌患病率约占全世界一半以上。对于失去外科手术机会或术后复发患者，肝动脉化疗栓塞(TACE)是其首选治疗方法，但五年生存率低于10%。原因在于TACE治疗仅栓塞现存肿瘤血管，无法抑制肿瘤血管新生。肿瘤血管新生是肝癌复发和转移的基础，如何抑制肿瘤血管新生是其研究的热点、难点问题。本课题将通过不同给药途径和不同剂量的动物实验组对比分析、利用影像学、组织学、细胞学等技术对雷帕霉素联合TACE治疗肝癌动物模型的实验价值及剂量-效应-毒性-免疫功能抑制关系进行评估；应用原位杂交、western blot、免疫组化和RT-PCR技术检测HIF-1a、VEGF、iNOS、JNK、IKK、BCL-xL和P53的基因、mRNA和蛋白表达水平，探索雷帕霉素抑制肝癌肿瘤血管新生及肿瘤增殖作用的机制。本课题将为中晚期、无手术机会和术后复发的肝癌患者探索新治疗方法的实施提供重要动物实验依据，提高肝癌的临床疗效。

1.项目背景.肝癌在世界范围内位居全部恶性肿瘤发病男性第 5 位、女性第 7 位，恶性.肿瘤死亡男性第 2 位、女性第 6 位。我国肝癌的标准发病率为 25.7/10 万人，占全球新发肝癌患者的 52.7%，居所有恶性肿瘤相关死亡率的 19.33%。因其起.病隐匿性强，多数患者就诊时已属中晚期，大部分已无外科手术切除机会。对于失去外科手术机会或术后复发的肝癌患者，肝动脉化疗栓塞(TACE)是其首选的治疗方法，其复发率、转移率较高，且多次介入治疗后，较多侧支循环的建立，往往无法达到再次完全栓塞治疗。究其原因，在于 TACE 仅能栓塞现存肿瘤滋养血管，无法抑制肿瘤血管新生。TACE术后肝癌组织缺氧诱发 HIF-1a、VEGF、iNOS 等蛋白因子过度表达，这些因子能加速肿瘤血管新生及肿瘤增殖的作用。肿瘤血管新生是肿瘤生长及转移的根本，故肝癌的治疗即要栓塞现有肿瘤血管，又要抑制肿瘤血管的新生，尤其是后者。雷帕霉素在体外实验中具有抑制肝癌肿瘤血管新生和促进癌细胞凋亡及自噬的作用。故用免疫抑制剂-雷帕霉素联合 TACE 治疗肝癌，即起到栓塞现存肿瘤滋养血管又抑制肿瘤血管新生的作用，从而增强肝癌治疗效果。.2.主要研究内容 .2.1 利用CT导引穿刺植入法建立 VX2 肝移植瘤兔模型。.2.2 应用不同的干预方法治疗 VX2 肝移植瘤兔模型，即：动脉灌注两种不同剂.量雷帕霉素联合 TACE 治疗、静脉注射雷帕霉素联合 TACE 治疗、单纯 TACE 治疗。.2.3 通过 CT 扫描评估肝移植瘤栓塞情况， DSA 造影宏观性评估肿瘤血管新生情况，免疫组化检查肿瘤组织微血管密度(MVD)，对比分析动脉灌注雷帕霉素联合 TACE 治疗肝癌的动物实验价值、对肿瘤血管新生的抑制作用。.2.4 通过western blot、免疫组化、RT-PCR 等技术检测 HIF-1a、VEGF、iNOS、BCL-2 和 Bax的mRNA 和 蛋白表达水平，分析雷帕霉素抑制肝癌肿瘤血管新生和肿瘤增殖作用的机制。.3. 重要结果.3.1 动脉灌注雷帕霉素联合TACE治疗兔肝移植瘤能够减少肿瘤新生血管的形成，提高介入栓塞治疗的效果。动脉灌注不同剂量雷帕霉素联合TACE治疗肝移植瘤，对肿瘤血管新生的抑制作用不同，剂量大在一定程度上效果显著；但还需进一步、数量较大的实验来验证其毒副作用。.3.2 不同途径给雷帕