扶正解毒法调控肿瘤炎性微环境TNF-α-NF-κB-Snail信号通路影响肺癌转移的分子机制

肿瘤炎性微环境在肿瘤细胞侵袭转移中起着重要作用。在确认扶正解毒法防治肺癌转移临床有效前提下，基于前期的研究积累，本研究拟选取肿瘤炎性微环境TNF-α-NF-κB-Snail信号通路为切入点，通过整体动物实验和体外细胞共培养实验，研究扶正解毒法中药调控TNF-α-NF-κB-Snail信号通路影响肺癌细胞转移的机制，采用分子生物学技术对该信号通路关键指标和其下游影响肺癌细胞转移的关键指标E-Cadherin、Vimentin、N-Cadherin、MMP-9、uPA等进行检测；在A549肺癌细胞株和THP-1巨噬细胞的共培养体系中进行TNF-α-NF-κB-Snail信号通路阻断剂实验和TNF-α干预实验；明确TNF-α-NF-κB-Snail信号通路与肺癌转移的关系，揭示扶正解毒法指导下的中药干预肿瘤炎性微环境对于防治肺癌转移的作用靶点和分子机制，以期为中医药防治肺癌转移提供数据和理论支持

本研究拟选取肿瘤炎性微环境TNF-α-NF-κB-Snail信号通路为切入点，通过整体动物实验和体外细胞共培养实验，研究扶正解毒法中药调控TNF-α-NF-κB-Snail信号通路影响肺癌细胞转移的机制。整体动物实验研究结果显示：1.与模型组相比较，肺瘤平膏治疗可以显著降低肿瘤引起的炎性细胞因子IL1-β、IL-6、TNF-α的表达（p<0.05），而且效果优于CTX治疗.2.对于抑制肿瘤生长（瘤体大小、重量）方面，肺瘤平膏联合CTX的治疗抑制肿瘤生长的效果优于单独肺瘤平膏或者CTX治疗，但各治疗组均与模型组有显著差异（p<0.05）。3.免疫组织化学法检测肿瘤组织中与TNF-α-NF-κB-Snail信号通路密切相关的指标,结果显示: 与模型组相比较，肺瘤平膏治疗组可以显著降低瘤体中NF-κB的表达,同时,肺瘤平膏可以减低瘤体中与肿瘤转移密切相关的指标MMP-9、N-cadherin的表达，却增加E-cadhrein 的表达。4.Westernblotting 研究结果显示，瘤体组织中NF-κB、MMP-9的表达，肺瘤平膏治疗组显著低于模型组,而E-cadherin的表达明显高于模型组. .体外研究结果显示：1. A549细胞与巨噬细胞共培养可发生上皮间质转化，而肺瘤平膏含药血清可以减少这一现象的发生；2 肺瘤平膏含药血清可显著抑制共培养条件下A549细胞的侵袭和迁移能力，以中剂量组效果最好，而环磷酰胺组此作用不强；3肺瘤平膏含药血清可以降低共培养条件下TNF-α的浓度，从24h开始下降显著，而对IL-1β、IL-6无明显作用；4 共培养条件下细胞总蛋白NF-κB p65和核蛋白Snail的含量均有所升高，肺瘤平膏含药血清可以降低NF-κB p65和Snail的表达；5肺瘤平膏含药血清可以上调共培养条件下E-cadherin蛋白的表达，下调N-cadherin和Vimentin的蛋白表达；6肺瘤平膏含药血清可显著降低共培养条件下A549细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达；7肺瘤平膏含药血清可显著降低共培养条件下A549细胞中MMP2、MMP9、PLAU的mRNA表达；8 肺瘤平膏含药血清可以抑制共培养条件发生的NF-κB p65核转位。