自身免疫相关性角膜融解发病机制及诊治研究

MMPs作为角膜融解病理作用机制中关键的作用酶，当角膜发生病理性融解时MMPs于角膜组织及泪液中均有特异性的高表达。分析自身免疫性角膜融解患者角膜病理组织与泪液中MMPs (MMP-2,MMP-9)含量变化的相关性，评判泪液中MMPs含量的增高对角膜融解进行性发展风险的提示作用。分析系统性自身免疫相关性炎症活动指标于眼部角膜融解发生风险的提示作用，特别对患有系统性自身免疫病的人群行白内障或屈光手术手术发生自发性角膜融解的风险进行术前评估。进行角膜融解动物实验模型建立，研究Zn 2+眼部局部应用对MMPs融解角膜组织的抑制作用并评价其安全及有效性,为自身免疫性角膜融解治疗提供新的思路。

作为一年期探索项目，课题组按照原计划书研究目标及内容在一年时间内完成了实验的构建及实施；通过角膜融解动物实验模型的构建，探讨了基质金属蛋白酶谱在角膜融解病理作用机制中的主要作用蛋白酶类型及主要病理作用定位；更进一步的，探讨了活化金属Zn2+离子对病理作用下基质金属蛋白酶生成的抑制作用，并观察了应用活化金属Zn2+离子进行基质金属蛋白酶作用下角膜基质融解过程的实质性干预作用。研究应用明胶酶谱及Western Blot技术观察到在碱烧伤诱导角膜融解小鼠模型的角膜融解急性期，基质金属蛋白酶-9存在显著的升高，提示其为参与病理性融解机制的主要作用蛋白；而不同于既往研究文献报道，模型中角膜融解急性期，基质金属蛋白酶-2并无显著表达。更进一步的，研究应用免疫组织化学技术观察到碱烧伤诱导角膜融解小鼠模型的角膜融解急性期，显著高表达的基质金属蛋白酶-9广泛分布于全角膜，而非既往假设理论猜想的定位于巨噬细胞及中性粒细胞更易于聚集的周边角膜区域，提示参与病理性融解作用的基质金属蛋白酶-9亦可在病理状态下由角膜原位细胞所产生；更进一步的，高表达的基质金属蛋白酶-9集中定位于角膜上皮层及前弹力层，而非既往假设理论猜想的定位于角膜基质层，提示其并非主要为假设理论猜想的角膜基质细胞所产生，而由角膜上皮细胞高度表达。在活化金属Zn2+离子对病理性角膜融解抑制作用研究中，通过不同浓度Zn2+离子溶液（1mmol/L及0.1mmol/L）局部干预观察活化金属Zn2+离子角膜融解抑制的有效性，并设置Zn2+离子溶液（1mmol/L）局部作用小鼠观察其应用的安全性。研究应用明胶酶谱、Western Blot及免疫组织化学技术进行观察，发现局部应用Zn2+离子溶液可有效降低组织基质金属蛋白酶-9的表达，且其呈剂量相关性。在对Zn2+离子溶液局部作用安全性的研究中，研究应用HE染色光学显微镜检查进行观察，未发现明显的组织结构破坏，提示其对局部组织结构影响较小。然而，应用活化金属Zn2+离子进行基质金属蛋白酶作用下角膜基质融解过程的实质性干预研究显示，虽然局部干预后基质金属蛋白酶-9表达量显著下降，但是通过HE染色光学显微镜以及裂隙灯显微镜的观察，发现活化金属Zn2+离子的局部应用对角膜实质性损伤仅起到一定抑制作用，并未能有效降低角膜病理性融解损伤，其临床应用价值仍需探讨。