RNA干扰缺氧诱导因子-1α对肉鸡腹水形成的影响

Hypoxia-inducible factor-la (HIF-lα) is a kind of important proteins regulating factor, involving in regulation expression when the body lack oxygen; and to play a key role in many diseases. Previous studies have shown that HIF-lα expression is closely related to broilers AS, but its research mechanism is not clear that HIF-lα with broilers AS therapy. Therefore, this study takes broilers as experimental animals, and used RNA interference in vivo and in vitro experiments. The vitro experiment is to construct a virus expression vector HIF-lα-shRNAi, and transduction into primitive broilers pulmonary artery endothelial cells (PAEC) under hypoxia, and HIF-1α, VEGF and ET-1 mRNA expression of cell will be detected; The vivo experiment is broilers that HIF-lα-shRNAi plasmids will be taken under the wing intravenously, through detection of biochemical indexes HCT, Hb and MDA etc. in blood, and HIF-1α, VEGF and ET-1 mRNA expression of organization will be detected; explore the mechanism of RNA interference HIF-lα in broilers PAEC, and finally clarify RNA interference HIF-lα expression associated with broilers AS, in order to provide new ideas for the treatment of broilers AS.

缺氧诱导因子-1α（HIF-lα)是一种重要的蛋白质调节因子，参与机体缺氧时各种细胞因子表达调控，并在多种疾病中起着关建作用。研究表明：HIF-lα表达与肉鸡 AS 发生密切相关，但关于HIF-lα与肉鸡 AS 冶疗作用机制的研究尚不清楚。因此，本项目以肉鸡为实验动物，利用 RNA 干扰HIF-lα基因进行体内外实验。体外实验是构建慢病毒表达载体—HIF-lα-shRNAi，再转导肉鸡肺动脉内皮细胞（PAEC）中，检测 HIF-1α、VEGF、ET-1表达水平；体内实验是肉鸡体内注射 HIF-lα-shRNAi 重组质粒，以检测血液中HCT、Hb、MDA 等生理生化指标以及组织中 HIF-1α、VEGF、ET-1表达水平。探讨 RNA干扰 HIF-lα在肉鸡 PAEC 中的作用机制，最终阐明 RNA 干扰 HIF-lα表达与肉鸡 AS 发生关系，为实现肉鸡 AS 的治疗提供新的思路。

缺氧诱导因子-1α（HIF-lα)是一种重要的蛋白质调节因子，参与机体缺氧时各种细胞因子表达调控，并在多种疾病中起着关建作用。研究表明：HIF-lα表达与肉鸡 AS 发生密切相关，但关于HIF-lα与肉鸡 AS 冶疗作用机制的研究尚不清楚。因此，本项目以肉鸡为试验动物，通过腹水综合征复制、RNA 干扰HIF-lα等试验，利用 RNA-seq、荧光定量 PCR、Western Blot、细胞凋亡等检测方法以验证 RNA 干扰 HIF-lα 基因在肉鸡 PAEC 中的效果。同时，初步探了中药丹参酮IIA对肉鸡腹水综合征的防治效果。结果表明：①在腹水综合征复制试验中发现了鸡生长缓慢并伴肺动脉的病变，肺动脉RNA-seq检测显示腹水鸡和正常鸡有895个差异表达基因，其中缺氧因子 HIF-1α存在差显著的变化，并参与了其重要的代谢通路；且miR-155、miR-489-3p, miR-1662, miR-460b-5p, miR-144-3p and miR-30e-5p对HIF-1α起了关键调控作用。② RNA 干扰HIF-lα基因在肉鸡的PAEC试验中，HIF-lα、TGF-β、ET-1、VEGF基因表达比对照组显著降低；转录组测序结果中，RNA 干扰HIF-lα 基因组在缺氧3h情况下与其它组相比存在较多基因差异显著，特是与正常组相比高达1276差异显著基因，且这些差异基因富集到了Focal adhesion、Calcium signaling pathway、Cell adhesion molecules、Ecm-receptor interaction等重要代谢通路。这说明了HIF-lα 基因与肉鸡腹水综合征的发生及肺动脉重构有着密切关系。③中药丹参酮IIA对肉鸡腹水综合征的有明显防治效果。总之，通过上述的研究，从整体、细胞和分子水平上了解了HIF-lα 基因与肉鸡腹水综合征的相互关系，部分阐明了HIF-lα 基因与肉鸡腹水综合征的机理，也为防治肉鸡腹水综合征提供了一定的理论基础，也对养鸡业发展具有重要学术和生产意义。从比较医学上，为人类心血管疾病研究提供有价值的借鉴。