罗氏易位携带者精子发生过程调控机制的研究

生精障碍是导致男性不育的主要因素，而男性罗氏易位携带者通常伴有少弱精症。罗氏易位是最常见的常染色体结构异常，占人群1‰，占不育症2%。由于男性罗氏易位携带者的Y染色体（生精基因的主要染色体）正常，因此男性罗氏易位携带者少弱精症的发病机制目前尚不清楚。本课题组的前期工作发现，男性罗氏易位虽常伴生精障碍，但其平衡精子可达80%左右；然而，其染色体平衡的胚胎却仅占1/3左右。因此，我们认为有必要结合临床罗氏易位的PGD工作，对男性罗氏易位携带者精子减数分裂等过程进行深入研究，同时利用临床标本和动物模型，通过对生殖细胞纺锤体和染色体形态观察、凋亡研究和染色体蛋白分析等，探讨男性罗氏易位减数分裂的细胞调控机制及生精障碍的发病机理。.预期研究结果不仅会加深对男性罗氏易位减数分裂的规律和细胞调控机制的认识水平，阐明男性罗氏易位携带者少弱精症的发病机制，还能为临床上正确诊治罗氏易位引起的不育提供科学依据。

罗氏易位在不孕不育夫妇中约占2%～3%。男性罗氏易位通常合并少弱精症。本项目在面上基金的支持下，从动物模型和人类研究两个方面着手，探讨雄性罗氏易位的生精障碍机制。.动物实验部分.（一）研究雄性杂合罗氏易位小鼠生精障碍的原因。.建立并验证罗氏杂合易位小鼠。检测罗氏杂合易位小鼠减数分裂复合体标志蛋白SYCP3。研究结果显示，杂合罗氏小鼠与正常小鼠的精母细胞的细胞核中减数分裂复合体标志蛋白SYCP3，两者没有显著区别。4周龄的杂合罗氏小鼠与正常小鼠的曲细精管中均可见各种时期的精细胞，二者没有显著性差异，但是9周龄的杂合罗氏小鼠圆形精子细胞发生凋亡和延长型精子细胞急剧减少。研究的结果提示：雄性杂合罗氏小鼠能够发生正常的减数分裂，但发生减数分裂的精母细胞数量要少于同龄同期曲细精管的正常小鼠。成年期杂合罗氏小鼠在圆形精子和延长型精子发生阶段出现问题，这可能是导致雄性杂合罗氏易位小鼠出现生精障碍的主要原因。.（二）PGD安全性研究.胚胎活检是PGD的一个重要步骤。我们利用time-lapse技术，提示PGD胚胎与正常胚胎是有发育上的差异的。本部分研究针对PGD与对照组小鼠的脑组织进行了取材，利用亚硫酸盐处理测序的方法对印记基因的表达进行了检测。研究结果提示：子代脑组织甲基化异常，提示可能与其神经退行性疾病发生有一定的相关性。.人类研究部分.（一）男性罗氏易位的生育期临床特点及诊治策略。.我们对80例男性罗氏易位携带者进行了96个PGD周期，选择正常或罗氏易位核型的胚胎移植。研究结果提示: 少、弱精症是男性罗氏易位携带者不育的主要原因，辅助生育技术可以解决其不育问题。PGD 技术可以为男性罗氏易位携带者获得健康的子代提供帮助，减少了女方流产及分娩畸形儿的发生率。.（二）PGD后囊胚冻融的特点及临床应用。.我们对PGD 诊断为遗传学异常的废弃囊胚进行冻融研究。分别观察囊胚冷冻前及解冻后的形态学特点。研究结果提示：无论何种冻融方法, 解冻后复苏存活的囊胚在体外培养30 min均可以观察到复苏现象, 体外培养4 h囊腔均扩张。在此研究基础上，我们将此技术进行了临床应用: 6对夫妇进行了解冻移植。其中3对夫妇解冻周期获得了临床妊娠。PGD 诊断后囊胚冻融技术的成熟与发展可以提高PGD 夫妇的累积妊娠率。.在项目执行期间，发表与本项目研究内容相关的SCI研究论文3篇，国内统计源期刊2篇。