银杏叶提取物及其活性成分对抑制脂肪肝形成的机制研究

银杏叶提取物（GBE）主要成分包括黄酮和内酯类化合物，目前临床上主要用于防治心脑血管类疾病,如阿尔茨海默病、周围血管闭塞等。前期研究中，发现GBE可抑制高脂饮食大鼠的脂肪肝形成，并减少培养肝细胞株的甘油三酯含量。通过脂代谢相关基因表达分析，发现GBE可促进脂肪酸代谢相关基因的表达。GBE及其成分槲皮素、山奈酚及异鼠李素均可增加脂肪酸代谢的关键酶-肉毒碱棕榈酰基转移酶1（CPT1）的表达，提示脂肪酸β氧化的代谢通路可能被促进。为进一步探索其降脂机理及其有效成分，我们将开展以下研究：从动物水平，集中关注GBE及其成分对肝脂及脂肪酸代谢通路影响；细胞水平，集中研究其对CPT1的调节及活性影响，采用启动子区分析、基因干扰、活性测定等生物学方法，确证GBE抑制脂肪肝的效应靶蛋白及其降脂的有效成分。通过本课题的研究，以期阐明GBE抑制脂肪肝形成的机理及其有效成分，为其药物开发提供靶点及先导化合物。

银杏叶提取物（Ginkgo biloba Leaf Extract，GBE），来源于银杏科植物银杏的干燥叶提取物，具有定喘止咳、活血化瘀、改善记忆等多种显著的药理作用。本课题研究发现GBE具有调节脂质代谢的作用，可降低大鼠肝脏中的脂质沉积现象并同时显著促进脂肪酸氧化关键酶肉毒碱棕榈酰基转移酶1A（Carnitine palmitoyltransferase 1a，CPT1A）的表达，并且这一过程主要通过其中的黄酮类活性成分槲皮素、山奈酚及异鼠李素发挥作用的。肝细胞内脂肪变性和过度沉积是非酒精性脂肪肝（Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）的主要病理特征，因此CPT1A在脂质代谢和NAFLD发展过程中发挥重要作用。进一步针对GBE调节CPT1A 基因的分子机制进行了深入探讨，为其降脂机制的阐述和后续药物的开发提供科学依据。研究发现GBE可促进CPT1A的转录，调控位点位于其转录起始点上游-50~-5 nt 区域。该区域中存在两个重要的 Sp1 转录因子结合位点，其中 a 位点对GBE效应的发挥具有更关键的作用，且在GBE三种黄酮类活性成分中有相似结果。进一步的凝胶电泳迁移率实验（EMSA）首先证实了启动子-50~-5区域中Sp1结合位点序列与 SP1 的结合，同时染色质免疫共沉淀 ChIP 实验则共同证明了 GBE 在细胞内促进了 Sp1 和该段区域的结合。研究同样发现槲皮素、山奈酚及异鼠李素亦可通过相同机制进行调节，其中以山奈酚和异鼠李素作用最强。因此，GBE可促进Sp1转录因子与 CPT1A启动子区域的结合进而增强 CPT1A 转录活性促进其表达，进一步影响脂肪酸代谢过程，发挥降脂效应。同时说明GBE及其黄酮类成分（槲皮素、山奈酚及异鼠李素）可能是治疗非酒精性脂肪肝的潜在药物。