活血化瘀中药对子宫肌瘤wnt信号转导途径抑制因子表达的影响

近年来研究发现Wnt信号转导途径是最典型的与肿瘤发生发展密切相关的信号途径。Wnt信号转导途径的异常活化与肿瘤的形成密切相关。并有研究表明wnt信号转导异常与子宫肌瘤有密切关系。wnt通路抑制剂SFRP1、WIF1，它们不但在机体内发挥主要功能，而且其本身也肯定会受到许多细胞内外因素的调控，通过抑制wnt信号通路产生抗肿瘤的效果，因此，wnt通路可能会作为抗肿瘤作用的一个靶点。本实验结合传统名老中医经验与现代研究，选择目前治疗子宫肌瘤公认的活血化瘀法，利用利用荧光定量RT-PCR技术和免疫细胞化学技术探讨活血化瘀中药对于子宫肌瘤wnt信号通路抑制因子表达的影响，探究活血化瘀中药治疗子宫肌瘤是否是通过wnt抑制因子而介导wnt信号转导途径的调控。从而证实wnt信号转导途径是治疗子宫肌瘤药物的作用靶点，这对于研究wnt信号转导途径在子宫肌瘤发病中所起的作用以及在子宫肌瘤的治疗中的应用价值是非常

通过采用胶原酶 I 消化法无菌取得子宫肌瘤细胞/肌细胞并进行传代。分别给予不同浓度的活血化瘀中药处理，CCK8法测定细胞生长抑制率；荧光定量RT-PCR法检测子宫肌瘤细胞Wnt信号转导通路的抑制因子SFRP1、WIF1 mRNA表达以及Wnt信号转导通路的关键基因β-catenin mRNA表达。免疫细胞化学Western blot法检测SFRP1、WIF1、β-catenin蛋白表达变化。观察活血化瘀中药对子宫肌瘤Wnt信号转导通路抑制因子表达的影响，探究活血化瘀中药治疗子宫肌瘤是否是通过Wnt抑制因子而介导Wnt 信号转导通路的调控，从而证实Wnt 信号转导通路是治疗子宫肌瘤药物的作用靶点。.结果：①原代培养的子宫肌瘤细胞呈梭形或者椭圆形，呈束的平滑肌细胞平行排列，部分区域可见典型的峰谷样生长，免疫组化鉴定结果，a-actin染色阳性。②不同浓度的活血化瘀中药作用于子宫肌瘤细胞24、48、72小时后，对子宫肌瘤细胞表现出明显的增殖抑制效应，其作用呈剂量和时间依赖性。③细胞培养第二天加药，加药48h后收集细胞性RT-PCR,westenblot分析。结果显示子宫肌瘤与正常子宫肌层均存在SFRP1、WIF1和β-catenin基因及蛋白表达。人子宫肌瘤细胞SFRP1、β-catenin mRNA含量明显高于于人正常子宫肌层细胞，不同药物干预子宫肌瘤细胞48h后，SFRP1、β-catenin mRNA表达均下调。人子宫肌瘤细胞WIF1 mRNA含量明显低于于人正常子宫肌层细胞，不同药物干预子宫肌瘤细胞48h后，WIF1 mRNA表达均上调，人子宫肌瘤细胞SFRP1、β-catenin蛋白含量明显高于人正常子宫肌层细胞（p<0.05）；SFRP1、β-catenin 蛋白表达均下调（p<0.05），人子宫肌瘤细胞WIF1蛋白含量明显低于于人正常子宫肌层细胞（p<0.05）；WIF1 蛋白表达均上调（p<0.05），两药物组对SFRP1、WIF1、β-catenin蛋白表达的影响无显著性差异（p>0.05）。