"HIF-1a/LOX-自噬"对卵巢癌细胞耐药及转移的调控作用

死亡率居妇科恶性肿瘤之首的上皮性卵巢癌(EOC)极易发生远处转移和多药耐药，探讨阐明卵巢癌耐药转移机制是亟待解决的关键问题。缺氧微环境与肿瘤发生进展、预后和转移密切相关；缺血缺氧诱导的自噬-溶酶体信号通过降解胞质细胞器及错误折叠蛋白，在细胞新陈代谢中发挥重要作用。我们前期工作：EOC耐药株自噬水平明显高于敏感株，自噬在药物抗卵巢癌效应中起保护作用；HIF-1a/LOX信号轴调节EOC耐药转移，HIF-1a抑制剂NSC606985在纳摩尔浓度即显示抗卵巢癌作用。本课题将首次聚焦关注缺氧环境下HIF-1a/LOX信号轴对EOC自噬的调控：检测缺氧和自噬相关分子在EOC原发灶及腹膜转移灶、敏感及耐药复发标本中的表达差异，继而深入研究HIF-1a/LOX-自噬对EOC耐药转移的调节效应，最后聚焦于HIF-1a抑制剂NSC606985通过调控自噬而发挥的抗癌效应，为开展卵巢癌靶向治疗提供理论依据。

死亡率居妇科恶性肿瘤之首的上皮性卵巢癌极易发生远处转移和多药耐药，探讨阐明卵巢癌耐药转移机制是亟待解决的关键问题。缺氧微环境与肿瘤发生进展，预后和转移密切相关，缺氧通过减少DNA修复和增加突变率，促进肿瘤活细胞遗传不稳定，赋予更恶性表型，导致侵略性肿瘤的生长，区域和远处转移。自噬是广泛存在于真核细胞内的一种溶酶体依赖性的降解途径，主要负责长寿命蛋白质和胞质细胞器的批量降解，通过单层或双层膜包裹待降解物（特征性自噬体），然后运送到溶酶体形成自噬溶酶体进行消化降解，其与泛素依赖性的蛋白酶体系统（降解短寿命蛋白质作用）一起在细胞的新陈代谢中行使着至关重要的作用本课题聚焦靶向缺氧微环境下自噬对卵巢癌耐药转移的调控机制。本课题基本按照研究计划逐步进行，如期完成，对双刃剑自噬在卵巢癌耐药转移中发挥的作用有更深一步的理解。研究结果如下：.（1）低氧可诱导上皮性卵巢癌细胞发生自噬，HIF-1α和自噬相关基因呈现出低氧浓度依赖型表达：本实验建立“常氧+转染HIF-1α质粒”，“缺氧+转染siRNA-HIF-1α”两个培养模式体系，在常氧状态下，转染HIF-1α质粒后Beclin 1、LC3蛋白水平相应增加。在低氧状态下，敲除HIF-1α后，Beclin 1、LC3表达相应减少，提示HIF-1α可以调控自噬水平。新型喜树碱类药物NSC606985在纳摩尔浓度即可发挥对HIF-1α的调控作用，呈现剂量依赖效应，但在两种卵巢癌细胞株中效应截然相反。随着NSC606985浓度的增加，逐渐下调HO8910PM细胞中低氧诱导的HIF-1α水平，自噬相关分子Beclin 1、LC3表达相应减少；而在HO8910细胞中则随药物剂量增加上调了HIF-1α蛋白水平，相应Beclin 1、LC3分子表达增加。(2) RhoA/ROCK 信号通路介导的细胞骨架蛋白的变化在低氧自噬环境中卵巢癌的耐药转移特性发挥调控作用：在上皮性卵巢癌细胞株中用3-MA或siRNA抑制LC3表达后，RhoA及其活性形式和下游的ROCK1表达相应抑制，并伴随着细胞骨架F-Actin的形态学变化。（3）自噬在卵巢癌细胞耐药中发挥促进作用：耐药细胞株中的自噬水平明显高于敏感细胞株，自噬抑制剂可以提高卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。（4）动物试验，通过宏观层面和微观分子学检测证实自噬抑制剂可抑制卵巢癌细胞的生长及转移。