畲药龙须藤抗类风湿性关节炎的药效物质基础及作用机制研究

羊蹄甲属植物龙须藤是畲医病证论治中针对痹症治疗的特色药，临床治疗类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）疗效确切。目前，国内外对龙须藤研究甚少，其化学成分和抗RA生物活性研究未见报道。申请者首次发现龙须藤正丁醇部位抗RA活性与雷公藤多苷相当，且呈剂量依赖性。本研究拟以CIA大鼠为药效筛选模型，进行龙须藤正丁醇部位中有效部位的分离并进行结构鉴定；采用RT-PCR、Western blot、基因克隆、细胞转染等分子生物学技术，观察龙须藤有效部位对TLRs/NF-κB信号通路中TLR4、下游接头分子（MyD88、TRIF）、核转录因子NF-κB及其相关靶基因（IL-6、IL-8、TNF-α）表达的影响，系统阐明龙须藤抗RA的作用机制，揭示其作用靶点。

本项目按原计划完成。即以CIA大鼠为药效筛选模型，筛选出了龙须藤有效部位正丁醇部位和乙酸乙酯部位，利用正相和反相低压层析(LPLC)、中压液相层析MPLC)、制备型高效液相层析(HPLC)等各种现代层析技术，对龙须藤有效部位进行活性成分的分离；利用制备型HPLC 或中压柱层析方法制备活性成分，供结构鉴定、药理筛选;利用现代波谱技术包括1H-NMR、13C-NMR、FAB-MS、ESI-MS、X-射线衍射等鉴定化学结构。同时建立胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠模型，对有效部位进行活性验证。建立了体内外模型(胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠模型和LPS诱导的滑膜细胞模型), 并采用RT-PCR、Western blot、基因克隆、细胞转染等分子生物学技术，研究龙须藤有效部位对TLRs/NF-κB 信号通路中TLR4、下游接头分子（MyD88、TRIF）、核转录因子NF-κB及其相关靶基因（IL-6、IL-8、TNF-α）表达的影响，系统的阐述了龙须藤抗RA 的作用机制。已发表相关论文5 篇，已接收待刊出1 篇。撰写相关研究论文投稿中2 篇。已申请发明专利2 项。