基于TGF-β/Smads通路及ADAMTS-2蛋白表达对老鼠簕生物碱A 抗肝纤维化作用机制的研究

Acanthus ilicifolius alkaloid A (4-hydroxy-2-benzoxazolone，HBOA) is one of the active mangrove plant compounds. Our primary experimental results suggested that HBOA possessed anti-inflammatory and anti-fibrotic properties. Recent studies also show that HBOA can significantly reduce the gene expression of TGF-β and Smad3, suggesting that its anti-fibrotic effects may be related with the TGF-β/Smad signaling pathways. New studies reveal that ADAMTS-2 protein is closely related with this pathway. This application is aimed to (1)investigate the effects of HBOA on the ADAMTS-2 protein and TGF-β/Smad signaling pathway in liver tissues of fibrotic rats induced by CCl4, (2) reveal the effects of HBOA on cell proliferation, apoptosis, cell cycle, collagen, ADAMTS-2 protein and regulation of TGF- β/Smad signaling pathways in vitro. We hope that these researches helpful in clarifying the mechanism of action of HBOA on liver fibrosis and the basis for its application in the treatment of liver fibrosis.

老鼠簕生物碱A （4-hydroxy-2-benzoxazolone，HBOA）是红树林植物老鼠簕的一个活性化合物。本课题组前期研究已揭示HBOA 具有良好的抗炎和抗肝纤维化作用，能显著下调TGF-β1 和Smad3 基因的表达，提示其抗肝纤维化作用机制可能与TGF-β/Smad 信号通路有关。最新国内外研究发现ADAMTS-2 蛋白与该信号通路相关，这引起我们极大的兴趣。本申请：（1）拟在CCl4 性大鼠肝纤维化模型上，研究HBOA 对肝组织ADAMTS-2 蛋白及TGF-β/Smad 信号通路相关因子基因/蛋白表达的影响；（2）采用原代HSCs 体外细胞模型，探讨HBOA 对细胞增殖、凋亡、细胞周期、胶原蛋白、ADAMTS-2 蛋白及TGF-β/Smad 信号通路的调控作用。本研究将有助于阐明HBOA 抗肝纤维化的作用机制，为其应用提供实验依据。

该项目原计划是研究老鼠簕生物碱A（HBOA）抗肝纤维化的作用机制，结果表明，HBOA能够抑制脂质过氧化，提高内源性抗氧化系统，减少胶原的生成及过度沉积，能够调节MMPs和TIMPs的表达促进ECM降解，能够显著抑制炎症因子，减少肝细胞凋亡，以及抑制HSC活化，减少ECM产生，其机制可能与抑制TGF-β1/Smads、NF-κB和ERK/MAPK信号通路有关。该项目进展顺利，提前圆满完成了预期目标。此后，我们及时调整实验方案，把目标转向HBOA对急性肝损伤作用机制的研究。实验分别采用LPS/D-GalN和对乙酰氨基酚造模，结果表明，HBOA可以减轻LPS/D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤严重程度，能够改善肝脏损伤，逆转ALT、AST和TBIL水平的异常，具有良好的抗氧化能力，并且能够抑制炎症反应，其机制可能与抑制TLR4/NF-κB和MAPK信号通路有关。结果还显示，HBOA对药物性肝损伤具有一定的缓解作用，其可能是与降低小鼠血清中异常升高的肝功能酶水平，增强抗氧化酶的作用，减少肝细胞的凋亡与线粒体的损伤，激活Nrf2信号通路及抑制NF-κB信号通路的表达有关。