microRNA－9及其甲基化调节在卵巢癌耐药机制中的研究

已知microRNA是癌症进程中的重要调节者，具有调节细胞分化、增殖和凋亡等多方面作用。microRNA-9（miR-9）在多个恶性肿瘤包括卵巢癌中表达均下调，并且复发性卵巢癌中进一步降调，提示miR-9有可能参与卵巢癌化疗耐药的调节。本项目利用甲基化调节、基因转染、Northern blot等多种分子生物学方法，系统研究miR-9在耐药上皮性卵巢癌中的内在调节机制，通过靶基因预测软件寻找miR-9调控耐药的可能靶点，并以此为基础深入研究miR-9相关的调节化疗耐药的信号传导途径，旨在充分理解miR-9参与调节化疗药物敏感性的相关分子机制，从而为逆转卵巢癌耐药提供实验依据和新靶点。

miRNA 是癌症进程中的重要调节因子，具有调节细胞生长分化，增殖和凋亡等多种作用。尽管近期研究表明miRNA在调节肿瘤细胞化疗敏感性方面起着至关重要的作用，但涉及miRNA在卵巢癌耐药的作用机制方面的研究并不多，至今为止与卵巢癌化疗敏感性相关的miRNA及其潜在的分子调节机制仍未被阐明。本项目利用细胞培养、甲基化调节，基因转染，PCR和Western Blot等多种分子生物学实验方法，系统研究了miR-9在耐紫杉醇上皮性卵巢癌中的内在调节机制。结果发现卵巢肿瘤石蜡组织能够可靠地用于miRNA的相关研究，拓宽了用于恶性肿瘤组织miRNA研究的实验组织标本来源范围；耐紫杉醇卵巢癌标本中特征性的miRNA表达如miR-9和卵巢癌患者的预后包括无进展生存期和总体生存期等密切相关；进一步实验发现miR-9的表达受基因甲基化的调节，耐药卵巢癌细胞株去甲基化后miR-9表达显著上调，并且去甲基化后细胞对紫杉醇的敏感性增加，提示基因甲基化具有调节卵巢癌对紫杉醇化疗敏感性的作用；同时我们通过靶基因预测软件确定了多个miR-9的可能靶点，利用双荧光报告系统和蛋白印迹实验证实了miR-9能通过抑制多个耐药相关蛋白的表达，从而调节卵巢癌对紫杉醇化疗敏感性，我们还利用siRNA敲除下游蛋白后，发现紫杉醇耐药卵巢癌细胞ST30细胞的耐药性比敲除前显著降低；此外，甲基化测序还发现紫杉醇具有通过促使卵巢癌细胞发生基因甲基化，进一步诱发耐药的能力。以上结果阐明了miR-9参与调节紫杉醇化疗敏感性的相关分子机制，为逆转卵巢癌耐药提供了新靶点和实验依据。