ZNF139-miR-185-MRP1通路调控胃癌细胞多药耐药形成的机制

Multidrug resistance (MDR) is the main reason accounts for chemotherapy failure.Therefor, MDR reversion is meaningful for the therapy of gastric cancer. Using two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis(2D- DIGE), liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) and gene chip assays, we identificated two MDR associated factors ZNF139 and miR-185 in parental and drug-resistant gastric cancer cell line. Further study confirmed that ZNF139 overexpression resulted in MDR in SGC7901 cell line accompanied by miR-185 down-regulation and multidrug resistance associated protein 1 (MRP1) up-regulation, while miR-185 transfection decreased MRP1 expression level and alleviated MDR in SGC7901/VCR cells. By bioinformatics analysis, several ZNF139 binding sites were found in miR-185 and MRP1 promoter regions, also two seed regions by miR-185 targeting were found in 3’-untranslated region of MRP1 mRNA. Therefore, we hypothesis that ZNF139-miR-185-MRP1 as a new pathway is involved in MDR regulation in gasstric cancer cells. This study will focus on the mechanism of MRP1 regulation by a new ZNF139-miR-185-MRP1 pathway applying chromatin immunoprecipitation, electrophoretic mobility shift assay and reporter gene assays. The project is of great means for the elucidation of the molecular mechanism underlining the formation of gastric cancer MDR.

多药耐药（MDR）是胃癌化疗失败的主要原因。应用比较蛋白质组学和基因芯片检测技术，我们鉴定出了在亲本与耐药胃癌细胞株中差异表达的转录因子ZNF139和miR-185。前期研究证实，过表达ZNF139的胃癌细胞表现出耐药特征，miR-185水平下调、MRP1上调；转染miR-185可增加细胞对化疗的敏感性，且多药耐药相关蛋白MRP1表达下调。生物信息学显示miR-185及MRP1的启动子区存在ZNF139的结合位点，而在MRP1的3’-非翻译区存在miR-185作用靶点。故我们推测ZNF139-miR-185-MRP1可能形成调控通路网络参与胃癌MDR。本项目拟在前期工作基础上，通过上调和下调ZNF139、miR-185表达, 并应用染色质免疫沉淀、电泳迁移率改变分析及报告基因分析等技术方法，阐明二者对MRP1表达的调控方式。本项目对揭示胃癌MDR形成的分子机制意义重大。

多药耐药（MDR）是胃癌化疗失败的主要原因。应用比较蛋白质组学和基因芯片检测技术，我们鉴定出了在亲本与耐药胃癌细胞株中差异表达的转录因子ZNF139和miR-185。我们前期已有较多结果发现ZNF139在胃癌中具有较为广泛的调控作用。本项目研究证实，过表达ZNF139的胃癌细胞表现出耐药特征，miR-185水平下调、MDR基因表达发生变化；转染miR-185可增加细胞对化疗的敏感性，且多药耐药相关基因表达下调。生物信息学研究发现miR-185及MRP1的启动子区存在ZNF139的结合位点，而在MRP1的3’-非翻译区存在miR-185作用靶点。本项目在前期工作基础上，通过上调和下调ZNF139、miR-185表达, 并应用染色质免疫沉淀、电泳迁移率改变分析及报告基因分析等技术方法，阐明ZNF139、miR-185对MRP-1等胃癌MDR相关基因表达的调控机制。本项目对揭示胃癌MDR形成的分子机制有意义。同时本研究还发现干扰内源性ZNF139、miR-185表达可通过影响胃癌细胞的凋亡能力而影响MDR，对ZNF139-miR-185通路参与胃癌MDR的机制做出了更为深入的阐述。在此基础上，我们还通过蛋白质组学技术发现干预ZNF139可引起胃癌细胞中膜联蛋白A（Annexins A, ANXA）家族成员的表达变化，因而进一步对ANXA2、ANXA7的功能和临床意义进行了分析，为进一步研究ZNF139-miR-185通路的功能和胃癌MDR形成机制提供了新思路。本研究共撰写及发表项目相关SCI 论文7篇，国家级核心期刊论文8篇。本项目培养博士研究生3名，硕士研究生7名，参加会议10次。该研究揭示了ZNF139-miR-185通路调控胃癌MDR的分子机理，对胃癌MDR的发病机制研究具有创新性和重要意义，进一步深入研究将为胃癌MDR逆转提供新思路，具有重要的理论和临床实用价值。