人肺癌DNA损伤后细胞周期调控机理研究

我们的前期研究发现DNA损伤后ATM可磷酸化PP1的抑制蛋白I-2，ATM磷酸化I-2使PP1活化。本研究应用体外辐射制作人肺腺癌A549细胞DNA损伤模型；应用westen blot检测辐射损伤后Ser43磷酸化状态；应用流式细胞仪检测辐射损伤后细胞周期变化；应用westen blot检测肺癌细胞株辐射损伤后I-2和磷酸化I-2在细胞内的定位和分布变化；应用基因敲除和基因重组、细胞转染技术构建I-2敲除肺癌细胞株；应用westen blot、RT-PCR检测PP1、I-2变化；应用流式细胞术检测人肺癌细胞对辐射的敏感性、细胞周期变化。本项目着重探讨ATM磷酸化I-2的氨基酸位点，ATM磷酸化I-2对PP1活化的作用。本项目对阐明DNA损伤的分子机理具有重要的理论意义和广阔的应用前景。